苏云金芽孢杆菌010菌株chi36基因克隆、表达和活性测定
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-18页 |
| 1 苏云金芽孢杆菌 | 第9页 |
| 2 几丁质酶 | 第9-15页 |
| ·几丁质酶概述 | 第9页 |
| ·几丁质酶分类 | 第9-10页 |
| ·几丁质酶来源 | 第10-15页 |
| ·植物几丁质酶 | 第10-11页 |
| ·动物几丁质酶 | 第11-13页 |
| ·微生物几丁质酶 | 第13-15页 |
| ·微生物几丁质酶理化性质 | 第13页 |
| ·微生物几丁质酶氨基酸序列 | 第13-14页 |
| ·微生物几丁质酶应用 | 第14-15页 |
| 3 Bt chi36 基因分子生物学研究 | 第15-17页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 材料与方法 | 第18-30页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| ·菌株 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·酶类 | 第18页 |
| ·其他试剂 | 第18-20页 |
| 2 方法 | 第20-30页 |
| ·总DNA 的提取 | 第20页 |
| ·Bt 几丁质酶基因克隆 | 第20-25页 |
| ·几丁质酶基因引物设计 | 第20-21页 |
| ·PCR 反应体系 | 第21页 |
| ·PCR 循环条件 | 第21页 |
| ·PCR 产物回收 | 第21-22页 |
| ·连接反应 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·转化和筛选 | 第22-23页 |
| ·提取重组质粒pMD-chi36 | 第23页 |
| ·重组质粒PCR 鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第24-25页 |
| ·基因片段测序 | 第25页 |
| ·几丁质酶蛋白的原核表达 | 第25-28页 |
| ·表达菌的构建 | 第25-27页 |
| ·质粒的提取 | 第25页 |
| ·质粒双酶切 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶中酶切产物回收 | 第25-26页 |
| ·酶切回收产物连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第26页 |
| ·转化和筛选 | 第26页 |
| ·重组质粒DNA 的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第26-27页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·IPTG 诱导 | 第27页 |
| ·样品的制备 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE | 第27-28页 |
| ·胶体几丁质平板降解 | 第28页 |
| ·几丁质酶酶活测定 | 第28-30页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第28页 |
| ·pH 对酶活的影响 | 第28-30页 |
| 结果与分析 | 第30-41页 |
| 1 几丁质酶基因的克隆及序列分析 | 第30-37页 |
| ·PCR 扩增及重组质粒酶切验证 | 第30-31页 |
| ·序列分析 | 第31-37页 |
| ·核苷酸序列同源性分析 | 第31-32页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第32-35页 |
| ·蛋白质功能区的预测 | 第35页 |
| ·跨膜信号分析 | 第35-37页 |
| 2 原核表达 | 第37-39页 |
| ·原核表达菌的构建 | 第37-39页 |
| ·目的蛋白诱导表达 | 第39页 |
| 3 胶体几丁质降解 | 第39-40页 |
| 4 几丁质酶酶活测定 | 第40-41页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第40-41页 |
| ·pH 对酶活的影响 | 第41页 |
| 小结与讨论 | 第41-43页 |
| 1 表达载体的选择 | 第42页 |
| 2 融合蛋白的纯化 | 第42页 |
| 3 展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
