英汉缩略语名词对照 | 第1-10页 |
中文摘要 | 第10-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
前言 | 第14-16页 |
第一部分 重组腺相关病毒核糖核酸酶抑制因子载体的构建 | 第16-24页 |
1 材料和方法 | 第16-20页 |
·材料 | 第16-17页 |
·表达载体、菌株 | 第16页 |
·细菌培养及分子克隆相关试剂 | 第16页 |
·主要仪器 | 第16页 |
·溶液的配制 | 第16-17页 |
·实验方法 | 第17-20页 |
·人RI 基因的扩增 | 第17-18页 |
·RT-PCR 两步法进行逆转录和PCR 反应 | 第18页 |
·重组真核表达的构建和鉴定 | 第18-20页 |
2 实验结果 | 第20-22页 |
·RI 基因扩增产物cDNA 片段的获得鉴定 | 第20-21页 |
·重组质粒的测序鉴定 | 第21-22页 |
·重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI 的酶切鉴定 | 第22页 |
·pAAV-IRES-hrGFP-RI 测序鉴定结果 | 第22页 |
3 讨论 | 第22-24页 |
第二部分 RI 腺相关病毒的制备、表达及纯化 | 第24-29页 |
1 材料和方法 | 第24-27页 |
·材料 | 第24页 |
·菌株和细胞 | 第24页 |
·细胞培养试剂 | 第24页 |
·其它试剂 | 第24页 |
·主要仪器与设备 | 第24页 |
·实验方法 | 第24-27页 |
·质粒的准备 | 第24-25页 |
·HEK-293 细胞的制备 | 第25页 |
·质粒转化 | 第25页 |
·病毒收集 | 第25-26页 |
·AAV 的纯化 | 第26页 |
·AAV 滴度测定 | 第26-27页 |
2 结果 | 第27-28页 |
·pAAV-IRES-hrGFP-RI 的产生转染细胞的鉴定 | 第27-28页 |
·重组pAAV-IRES-hrGFP/RI 腺相关病毒的感染滴度的测定 | 第28页 |
3 讨论 | 第28-29页 |
第三部分 pAAV-IRES-hrGFP-RI 真核表达质粒病毒对T24 细胞中RI 基因表达的检测 | 第29-35页 |
1 材料和方法 | 第29-32页 |
·材料 | 第29-31页 |
·菌株和细胞 | 第29页 |
·细胞培养和抗体相关试剂 | 第29页 |
·其它试剂 | 第29页 |
·细胞培养用试剂配置 | 第29页 |
·核酸分析用试剂配置 | 第29-30页 |
·蛋白分析用试剂配制 | 第30-31页 |
·主要仪器与设备 | 第31页 |
·实验方法 | 第31-32页 |
·人膀胱癌T24 细胞的培养 | 第31页 |
·重组质粒的去内毒素处理和细胞转染 | 第31页 |
·Western 检测RI 蛋白表达 | 第31-32页 |
·免疫细胞化学 | 第32页 |
·统计学分析 | 第32页 |
2 实验结果 | 第32-34页 |
·RI 基因m RNA 的转录水平 | 第32-33页 |
·RI 蛋白的表达水平 | 第33-34页 |
·免疫细胞化学分析 | 第34页 |
3 讨论 | 第34-35页 |
第四部分 对T24 细胞的黏附、迁移和侵袭等生物学特性的影响 | 第35-42页 |
1 材料与方法 | 第35-37页 |
·材料 | 第35页 |
·细胞及细胞培养试剂 | 第35页 |
·抗体试剂 | 第35页 |
·其它试剂 | 第35页 |
·主要仪器与设备 | 第35页 |
·实验方法 | 第35-37页 |
·细胞形态观察 | 第35页 |
·细胞黏附能力检测 | 第35-36页 |
·细胞迁移能力检测 | 第36页 |
·侵袭能力检测 | 第36页 |
·细胞骨架微丝的荧光分析观察 | 第36页 |
·统计学分析 | 第36-37页 |
2 实验结果 | 第37-41页 |
·细胞的形态学改变 | 第37页 |
·黏附能力改变 | 第37-38页 |
·迁移能力改变 | 第38-39页 |
·侵袭能力改变 | 第39-40页 |
·细胞骨架微丝的变化 | 第40-41页 |
3 讨论 | 第41-42页 |
结论 | 第42-44页 |
参考文献 | 第44-46页 |
文献综述 | 第46-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第55页 |