| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-16页 |
| 1 CDK2 的作用 | 第10页 |
| 2 RNA 干扰的原理 | 第10-12页 |
| 3 siRNA 在RNA 干扰中的作用 | 第12-13页 |
| 4 siRNA 表达载体的研究 | 第13-16页 |
| 1 实验设计方案 | 第16-20页 |
| ·实验目的和意义 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17页 |
| ·构建能表达shRNA 的RNAi 质粒 | 第17页 |
| ·应用脂质体将RNAi 质粒转染入不同肿瘤细胞 | 第17页 |
| ·分析RNAi 质粒对于肿瘤细胞的抑制作用 | 第17页 |
| ·技术路线和实验方案 | 第17-20页 |
| ·技术路线 | 第17-18页 |
| ·实验方案 | 第18-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-40页 |
| ·材料与试剂 | 第20-27页 |
| ·质粒与细胞株 | 第20页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂配制 | 第21-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·目的基因靶序列的确定 | 第27页 |
| ·RNAi 质粒的构建 | 第27-31页 |
| ·细胞的培养、冻存与复苏 | 第31-32页 |
| ·转染 | 第32-33页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第33页 |
| ·Western blotting 分析法分析CDK2 蛋白表达情况 | 第33-36页 |
| ·RT-PCR 分析细胞中cdk2 基因mRNA 的表达情况 | 第36-38页 |
| ·MTT 法检测细胞的生长情况 | 第38页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第38-39页 |
| ·统计学方法 | 第39-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-48页 |
| ·RNAi 质粒的成功构建 | 第40-41页 |
| ·荧光显微镜下观察转染结果 | 第41-42页 |
| ·RNAi 质粒能抑制cdk-2 基因的表达 | 第42-45页 |
| ·应用Western blotting 分析CDK2 蛋白表达 | 第42-43页 |
| ·应用RT-PCR 分析cdk2 基因的表达情况 | 第43-45页 |
| ·MTT 分析抑制cdk2 的表达细胞生长受到抑制 | 第45-46页 |
| ·流式细胞术分析抑制cdk2 的表达引起细胞周期的变化 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录A 缩写表 | 第57-58页 |
| 在学研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 综述 哺乳动物中介导 RNA 干扰的载体研究进展 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63页 |
