| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 英文缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-33页 |
| ·材料 | 第16-22页 |
| ·细胞株与菌株 | 第16页 |
| ·质粒 | 第16-17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·主要实验设备 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·常规溶液 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第22页 |
| ·大肠杆菌的培养与保存 | 第22-23页 |
| ·细胞的复苏、传代与冻存 | 第23-24页 |
| ·细胞计数 | 第24-25页 |
| ·细胞转染 | 第25页 |
| ·质粒的提取(CTAB法) | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·酚抽提纯化PCR产物 | 第27-28页 |
| ·细胞中总RNA的提取(Trizol法) | 第28页 |
| ·RT-PCR反应 | 第28页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳法检测DNA | 第29页 |
| ·DNA的粘末端补平 | 第29-30页 |
| ·线状DNA的去磷酸化 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶回收DNA | 第30页 |
| ·DNA连接反应 | 第30-31页 |
| ·Western-blot检测蛋白表达 | 第31-33页 |
| 第三章 靶向hTERT基因的siRNA序列的筛选 | 第33-41页 |
| ·实验材料与试剂 | 第33页 |
| ·实验内容 | 第33-35页 |
| ·pRS-hTERT系列载体的验证 | 第33页 |
| ·载体pRS-shT1-pRS-shT5的瞬时转染 | 第33-34页 |
| ·载体pRS-shT1-pRS-shT5的稳定筛选 | 第34页 |
| ·pRS-shT1-pRS-shT5稳定筛选细胞株的检测 | 第34页 |
| ·稳定筛选细胞株的MTT检测 | 第34页 |
| ·稳定筛选细胞株的流式细胞检测 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-39页 |
| ·pRS-hTERT系列载体的酶切验证结果 | 第35-36页 |
| ·瞬时转染RT-PCR结果 | 第36-37页 |
| ·稳定筛选结果 | 第37页 |
| ·稳定筛选的RT-PCR结果 | 第37-38页 |
| ·MTT结果 | 第38页 |
| ·流式细胞检测稳定筛选细胞的细胞凋亡 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 肝靶向apoA-Ⅰ启动子的活性修饰 | 第41-50页 |
| ·实验材料与试剂 | 第42页 |
| ·实验内容 | 第42-44页 |
| ·载体pEA-CMV的构建 | 第42页 |
| ·pEA-SV40的构建 | 第42-43页 |
| ·载体pEA-CMV、pEA-SV40转录活性的检测 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·pEA-CMV载体构建 | 第44-45页 |
| ·pEA-SV40载体构建 | 第45-47页 |
| ·GFP荧光表达检测结果 | 第47页 |
| ·RT-PCR结果 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 肝特异性shRNA干扰载体系统的构建与鉴定 | 第50-58页 |
| ·实验材料与试剂 | 第51页 |
| ·实验内容 | 第51-53页 |
| ·载体pDA-shA-T2与pDA-shA-T2-CMV的构建 | 第51-52页 |
| ·Western-blot分析hTERT蛋白表达 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-57页 |
| ·载体pDA-shA-T2的酶切测序结果 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR结果 | 第54页 |
| ·Western-blot分析结果 | 第54-55页 |
| ·载体pDA-shA-T2-CMV的酶切测序结果 | 第55-56页 |
| ·TR-PCR结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第六章 结论 | 第58-59页 |
| 综述 | 第59-67页 |
| 1 诱导型启动子 | 第60页 |
| 2 组织特异性启动子 | 第60-62页 |
| ·正常组织特异性启动子 | 第60-61页 |
| ·肿瘤组织特异性启动子 | 第61-62页 |
| 3 合成型启动子 | 第62-66页 |
| ·增强组织特异性 | 第62页 |
| ·改变启动子的转录活性 | 第62-66页 |
| ·启动子活性修饰方式 | 第63-65页 |
| ·活性修饰的应用 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |
| 发表文章 | 第72页 |
