| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| ·杆状病毒概述 | 第10-11页 |
| ·杆状病毒表达载体系统 | 第11-17页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的特点 | 第11-12页 |
| ·影响杆状病毒表达载体系统效率的因素 | 第12-13页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的研究进展 | 第13-17页 |
| ·昆虫细胞内的同源重组策略 | 第13页 |
| ·昆虫细胞内的高频重组策略 | 第13-14页 |
| ·酵母人工染色体重组策略 | 第14页 |
| ·体外酶促定位重组策略 | 第14页 |
| ·大肠杆菌细胞内介导的重组策略 | 第14-15页 |
| ·MultiBac多基因杆状病毒表达载体系统 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的进一步发展 | 第16-17页 |
| ·BmNPV-家蚕幼虫表达系统概述 | 第17-20页 |
| ·BmNPV-家蚕幼虫表达系统的特点 | 第17页 |
| ·BmNPV-家蚕幼虫表达系统的研究进展 | 第17-19页 |
| ·目的基因在 BmNPV-家蚕幼虫表达系统的高效表达 | 第19-20页 |
| ·医药用蛋白基因在 BmNPV-家蚕幼虫表达系统中的高效表达 | 第19页 |
| ·兽药用及农药用蛋白基因在 BmNPV-家蚕幼虫表达系统中的高效表达 | 第19-20页 |
| ·BmNPV-家蚕幼虫表达系统的发展前景 | 第20页 |
| ·重组技术概述 | 第20-22页 |
| ·Red-Gam 重组 | 第20-21页 |
| ·Cre-LoxP 重组 | 第21页 |
| ·FLP /FRT 重组 | 第21页 |
| ·零背景转座技术高效构建重组 BmNPV | 第21-22页 |
| 2 引言 | 第22-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-33页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·质粒菌株病毒细胞系及家蚕 | 第23页 |
| ·试剂与仪器 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第24-28页 |
| ·质粒 DNA 的小量制备 | 第24页 |
| ·BmN 细胞的总DNA 提取 | 第24-25页 |
| ·PCR 反应、酶切和酶连 | 第25-27页 |
| ·PCR 反应体系 | 第25-26页 |
| ·酶切体系 | 第26页 |
| ·载体去磷酸化 | 第26页 |
| ·酶连体系 | 第26页 |
| ·DNA 片段的纯化 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第27-28页 |
| ·CaCl_2法制备新鲜感受态细胞 | 第27页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·CaCl_2法转化大肠杆菌 | 第27页 |
| ·电转化法转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| ·昆虫细胞培养及细胞转染技术 | 第28-31页 |
| ·细胞培养基的配制 | 第28页 |
| ·细胞传代培养 | 第28-29页 |
| ·BmN 细胞的传代培养 | 第28页 |
| ·细胞计数 | 第28页 |
| ·细胞活力测定 | 第28-29页 |
| ·细胞的冻存和复苏 | 第29页 |
| ·细胞的冻存 | 第29页 |
| ·冻存细胞的复苏 | 第29页 |
| ·细胞转染技术 | 第29-30页 |
| ·病毒的增殖 | 第30页 |
| ·病毒的滴度测定 | 第30-31页 |
| ·Bac-to-Bac 技术 | 第31页 |
| ·转座 | 第31页 |
| ·重组Bacmid DNA 的提取 | 第31页 |
| ·稳定细胞系BmN-A3ph 对BmBac-gfp 的包装拯救效果检测 | 第31页 |
| ·拯救型多角体病毒复感染家蚕幼虫 | 第31-32页 |
| ·实验常用溶液，试剂配方 | 第32-33页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·抗生素和培养基 | 第32-33页 |
| 4 结果和分析 | 第33-49页 |
| ·转座辅助载体pIE2-piggyBac 的构建 | 第33-36页 |
| ·IE2 启动子的克隆 | 第33页 |
| ·IE2 启动子基因的T 载克隆 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pFAIE2 的构建 | 第34-35页 |
| ·转座辅助载体pIE2-piggyBac 的构建 | 第35-36页 |
| ·转座供体载体 pBac-A3ph-IE1zeo 的构建 | 第36-44页 |
| ·重组质粒pRADM-A3 的构建 | 第36-37页 |
| ·A3 启动子的克隆 | 第36页 |
| ·A3 启动子基因的T 载克隆 | 第36页 |
| ·重组质粒pRADM-A3的构建 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pUltraBac-ph 的构建 | 第37-39页 |
| ·多角体基因(ph) ORF 的PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·ph ORF 基因的T 载克隆 | 第38页 |
| ·pUltraBac-ph质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pRADM-A3ph 的构建 | 第39-40页 |
| ·Ts-IE1zeo的构建 | 第40-41页 |
| ·IE1zeo的PCR扩增 | 第40页 |
| ·IE1zeo 的T 载克隆 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pSL-A3ph-IE1zeo 的构建 | 第41-43页 |
| ·转座供体载体pBac-A3ph-ie1zeo 的构建 | 第43-44页 |
| ·转染及稳定细胞系筛选 | 第44-45页 |
| ·确定抗生素筛选最佳浓度 | 第44页 |
| ·细胞转染及筛选 | 第44-45页 |
| ·PCR检测稳定细胞系BmN- A3ph | 第45页 |
| ·拯救细胞系BmN-A3ph 对BmBac-gfp 的包装拯救效果检测 | 第45-47页 |
| ·拯救型多角体病毒复感染家蚕幼虫 | 第47-49页 |
| 5 结论和讨论 | 第49-51页 |
| ·结论 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| ABSTRACT | 第58-59页 |
