| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-42页 |
| 第一章 捻转血矛线虫与捻转血矛线虫病 | 第14-22页 |
| 1 病原学 | 第14-15页 |
| 1.1 虫体形态 | 第14-15页 |
| 1.2 生活史 | 第15页 |
| 2 捻转血矛线虫病 | 第15-18页 |
| 2.1 流行病学 | 第15-16页 |
| 2.2 临床症状及病理变化 | 第16页 |
| 2.3 诊断与防治 | 第16-18页 |
| 参考文献 | 第18-22页 |
| 第二章 捻转血矛线虫免疫机理研究进展 | 第22-32页 |
| 1 排斥免疫机制 | 第22-23页 |
| 1.1 快速排斥机制 | 第22-23页 |
| 1.2 迟发性排斥机制 | 第23页 |
| 2 细胞免疫 | 第23-25页 |
| 3 体液免疫 | 第25页 |
| 4 免疫记忆及遗传因素 | 第25-26页 |
| 5 捻转血矛线虫的免疫防治 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-32页 |
| 第三章 天冬氨酸蛋白酶抑制剂研究进展 | 第32-42页 |
| 1 蛋白酶抑制剂 | 第32-35页 |
| 1.1 蛋白酶抑制剂的分类及作用机理 | 第32-33页 |
| 1.2 蛋白酶抑制剂的应用 | 第33-34页 |
| 1.3 捻转血矛线虫蛋白酶抑制剂研究进展 | 第34-35页 |
| 2 天冬氨酸蛋白酶及抑制剂 | 第35-38页 |
| 2.1 天冬氨酸蛋白酶 | 第35页 |
| 2.2 天冬氨酸蛋白酶抑制剂的分类 | 第35-36页 |
| 2.4 天冬氨酸蛋白酶抑制剂的应用 | 第36-37页 |
| 2.5 天冬氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫领域的研究 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 第二篇 试验研究 | 第42-90页 |
| 第四章 捻转血矛线虫天冬氨酸蛋白酶抑制剂的克隆及表达 | 第42-58页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 实验动物 | 第42-43页 |
| 1.2 菌种和载体 | 第43页 |
| 1.3 工具酶和主要试剂 | 第43页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第43页 |
| 1.5 本试验自配溶液、试剂 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-50页 |
| 2.1 API基因的克隆 | 第43-46页 |
| 2.2 构建pMD18-T/API重组质粒 | 第46-48页 |
| 2.3 API重组蛋白的表达 | 第48-50页 |
| 3 绪果 | 第50-55页 |
| 3.1 API基因的克隆 | 第50-51页 |
| 3.2 捻转血矛线虫API基因的序列分析 | 第51-53页 |
| 3.2 重组质粒pET32/API的原核表达 | 第53页 |
| 3.3 重组API蛋白的定量分析 | 第53-54页 |
| 3.4 Western blot分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 第五章 重组API蛋白的抑制活性测定 | 第58-66页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 酶和底物 | 第58-59页 |
| 1.2 溶液配制 | 第59页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-60页 |
| 2.1 API对胃蛋白酶抑制作用的SDS-PAGE分析 | 第59页 |
| 2.2 API对胃蛋白酶及胰蛋白酶抑制活性的测定 | 第59-60页 |
| 2.3 API的热稳定性研究 | 第60页 |
| 2.4 API的pH稳定性研究 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| 3.1 API对胃蛋白酶抑制作用的结果分析 | 第60-61页 |
| 3.2 重组API蛋白的热稳定性研究 | 第61-62页 |
| 3.3 重组API的pH稳定范围 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 第六章 捻转血矛线虫API基因阶段表达特性分析 | 第66-76页 |
| 1 材料 | 第66-67页 |
| 1.1 实验动物 | 第66-67页 |
| 1.2 主要试剂 | 第67页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第67页 |
| 1.4 本试验自配溶液、试剂 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-70页 |
| 2.1 各阶段捻转血矛线虫总RNA的提取 | 第67页 |
| 2.2 各阶段捻转血矛线虫cDNA的合成 | 第67-68页 |
| 2.3 引物设计与合成 | 第68页 |
| 2.4 引物扩增效率的验证试验 | 第68-69页 |
| 2.5 API基因的荧光定量PCR反应 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-73页 |
| 3.1 引物扩增效率验证试验 | 第70-71页 |
| 3.2 API基因在各阶段捻转血矛线虫cDNA中的荧光定量PCR结果 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第七章 API在捻转血矛线虫雌雄虫中的定位 | 第76-82页 |
| 1 材料 | 第76-77页 |
| 1.1 试验动物 | 第76页 |
| 1.2 主要试剂 | 第76页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第76页 |
| 1.4 本试验自配溶液、试剂 | 第76-77页 |
| 2 方法 | 第77页 |
| 2.1 大鼠抗体血清的制备 | 第77页 |
| 2.2 冰冻切片的制备 | 第77页 |
| 2.3 免疫组化反应 | 第77页 |
| 3 结果 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第八章 重组API对山羊PBMC细胞因子表达的影响 | 第82-90页 |
| 1 材料 | 第82-83页 |
| 1.1 试验动物 | 第82-83页 |
| 1.2 菌种和质粒 | 第83页 |
| 1.3 主要试剂 | 第83页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第83页 |
| 1.5 本试验自配溶液、试剂 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-85页 |
| 2.1 pET32/API的提取、鉴定 | 第83页 |
| 2.2 重组API蛋白的诱导表达 | 第83页 |
| 2.3 重组API蛋白的纯化及变性、复性 | 第83页 |
| 2.4 山羊PBMCs的分离、培养 | 第83-84页 |
| 2.5 RT-PCR反应 | 第84页 |
| 2.6 荧光定量PCR反应 | 第84-85页 |
| 3 结果 | 第85页 |
| 3.1 重组API蛋白刺激后各PBMCs细胞因子的表达情况 | 第85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 全文总结 | 第90-92页 |
| 附表 | 第92-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
