| 中文摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-9页 |
| 本论文资助项目 | 第10-16页 |
| 中英文缩略词语 | 第16-19页 |
| 前言 | 第19-23页 |
| 第一部分 O-GlcNAc糖基化Nav1.5蛋白对糖尿病大鼠心脏电生理功能及室性心动过速的影响 | 第23-61页 |
| 一.材料与方法 | 第23-31页 |
| 1.实验动物 | 第23页 |
| 2.动物实验所需设备及仪器 | 第23-25页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第25-31页 |
| 3.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.2 主要试剂配置 | 第26-31页 |
| 二.实验方法 | 第31-43页 |
| 1.构建糖尿病大鼠模型和一般生命体征监测 | 第31页 |
| 2.大鼠无创血压测量 | 第31-32页 |
| 3.大鼠无创心功能测量 | 第32页 |
| 4.大鼠有创心电图实时监测 | 第32-33页 |
| 5.大鼠程序性电刺激实验 | 第33页 |
| 6.大鼠心脏标本处理及病理切片制作 | 第33-34页 |
| 7.免疫组织化学染色 | 第34-35页 |
| 8.组织免疫荧光标记 | 第35-36页 |
| 9.心肌组织蛋白提取和蛋白分离提纯 | 第36-37页 |
| 10.BCA蛋白浓度的测定 | 第37页 |
| 11.SDS-PAGE蛋白凝胶电泳与转膜 | 第37-38页 |
| 12.蛋白质印记抗体标记与免疫显色 | 第38-39页 |
| 13.心肌组织的免疫共沉淀反应 | 第39-40页 |
| 14.心肌组织RNA提取和测定 | 第40页 |
| 15.逆转录PCR合成cDNA | 第40-41页 |
| 16.实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第41-42页 |
| 17.统计学分析 | 第42-43页 |
| 三.实验结果 | 第43-58页 |
| 1.1 各组大鼠的一般生理状况 | 第43页 |
| 1.2 各组大鼠的心功能和心电参数 | 第43-45页 |
| 1.3 糖尿病大鼠心脏发生糖尿病性心肌损伤 | 第45-46页 |
| 1.4 糖尿病大鼠心脏心电图和参数改变 | 第46-48页 |
| 1.5 DHI后增加心律失常的易感性 | 第48-49页 |
| 1.6 DHI时心肌组织内Nav1.5的表达和分布 | 第49-50页 |
| 1.7 首次证实Nav1.5蛋白存在O-GlcNAc糖基化 | 第50-51页 |
| 1.8 DHI时Nav1.5结合蛋白表达及之间互相作用改变 | 第51-52页 |
| 1.9 DHI早期Nav1.5的表达和分布情况。 | 第52-54页 |
| 1.10 DHI早期Nav1.5的结合蛋白表达水平 | 第54-56页 |
| 1.11 糖尿病大鼠心肌组织内Cx-43和KCNQ1的蛋白表达 | 第56-58页 |
| 四.讨论 | 第58-60页 |
| 五.结论 | 第60-61页 |
| 第二部分 离体细胞实验验证Nav1.5的O-GlcNAc糖基化在糖尿病所致室性心律失常中作用及机制研究 | 第61-96页 |
| 一.材料与方法 | 第61-70页 |
| 1.实验细胞 | 第61页 |
| 2.细胞实验所需设备及仪器 | 第61-62页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第62-70页 |
| 二.实验方法 | 第70-80页 |
| 1.乳鼠原代心肌细胞的分离与培养 | 第70-71页 |
| 2.高糖处理模拟糖尿病心肌损伤 | 第71页 |
| 3.原代心肌细胞的蛋白提取和蛋白分离提纯 | 第71-72页 |
| 4.BCA蛋白浓度的测定 | 第72页 |
| 5.SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第72-73页 |
| 6.蛋白质印记抗体标记与显色 | 第73-74页 |
| 7.心肌细胞的免疫共沉淀反应 | 第74页 |
| 8.心肌细胞RNA提取和测定 | 第74-75页 |
| 9.逆转录PCR合成cDNA | 第75-76页 |
| 10.实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第76-77页 |
| 11.细胞免疫荧光 | 第77页 |
| 12.腺病毒载体的选择和构建 | 第77-78页 |
| 13.干扰片段的选择和构建 | 第78-79页 |
| 14.统计学分析 | 第79-80页 |
| 三.实验结果 | 第80-92页 |
| 2.1 总蛋白O-GlcNAc糖基化水平与Nav1.5的表达正相关 | 第80-81页 |
| 2.2 HG处理原代心肌细胞的时间点实验 | 第81-82页 |
| 2.3 HG处理对原代心肌细胞内Nav1.5表达和分布的影响 | 第82页 |
| 2.4 HG处理增加Nav1.5蛋白的O-GlcNAc糖基化 | 第82-83页 |
| 2.5 药物促进或抑制胞浆内Nav1.5蛋白表达的最佳时间 | 第83-84页 |
| 2.6 药物促进或抑制胞浆内Nav1.5蛋白表达的最低浓度 | 第84-85页 |
| 2.7 药物改变O-GlcNAc糖基化水平影响Nav1.5表达和分布 | 第85-86页 |
| 2.8 药物改变Nav1.5蛋白的O-GlcNAc糖基化水平 | 第86-87页 |
| 2.9 原代心肌细胞内干扰或过表达OGT | 第87-88页 |
| 2.10 OGT介导的O-GlcNAc糖基化影响Nav1.5表达和分布 | 第88-90页 |
| 2.11 OGT介导的O-GlcNAc糖基化修饰Nav1.5 | 第90-91页 |
| 2.12 HG处理对Nav1.5结合蛋白表达及互相作用的影响 | 第91-92页 |
| 四.讨论 | 第92-95页 |
| 五.结论 | 第95-96页 |
| 第三部分 高糖处理对钠离子通道表达、分布和功能的影响 | 第96-118页 |
| 一.材料与方法 | 第96-101页 |
| 1.实验细胞 | 第96页 |
| 2.主要实验设备及仪器 | 第96-97页 |
| 2.1 细胞电生理实验所需的实验器材 | 第96-97页 |
| 2.2 一般细胞实验所需的实验器材 | 第97页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第97-101页 |
| 3.1 细胞电生理实验所需的主要试剂 | 第97-98页 |
| 3.2 一般细胞实验所需的实验器材 | 第98页 |
| 3.3 实验试剂配置 | 第98-101页 |
| 二.实验方法 | 第101-110页 |
| 1.HEK293T细胞的复苏、换液、传代和冻存 | 第101-103页 |
| 1.1 复苏 | 第101页 |
| 1.2 换液 | 第101-102页 |
| 1.3 传代 | 第102页 |
| 1.4 冻存 | 第102-103页 |
| 2.SCN5A质粒的扩增和纯化 | 第103-104页 |
| 2.1 SCN5A载体构建 | 第103页 |
| 2.2 SCN5A质粒扩增 | 第103页 |
| 2.3 SCN5A质粒纯化 | 第103-104页 |
| 3.HEK293T细胞的瞬时转染 | 第104-105页 |
| 4.细胞蛋白的提取及分离 | 第105页 |
| 5.BCA蛋白浓度的测定 | 第105-106页 |
| 6.SDS-PAGE蛋白凝胶电泳与转印 | 第106-107页 |
| 7.蛋白质印记抗体标记与显色 | 第107页 |
| 8.考马斯亮蓝染色法 | 第107-108页 |
| 9.全细胞膜片钳记录钠离子通道电流与分析 | 第108-109页 |
| 10.晚钠电流的测定与分析 | 第109页 |
| 11.统计学方法 | 第109-110页 |
| 三.实验结果 | 第110-115页 |
| 3.1 HG对293T细胞内Nav1.5表达和分布的影响 | 第110-111页 |
| 3.2 HG和药物处理对钠通道电流密度和峰电流影响 | 第111-112页 |
| 3.3 HG和药物处理对钠通道稳态激活和稳态失活影响 | 第112-113页 |
| 3.4 HG和药物处理对钠通道失活后恢复的影响 | 第113-114页 |
| 3.5 HG和药物处理对钠通道晚钠电流的影响 | 第114-115页 |
| 四.讨论 | 第115-117页 |
| 五.结论 | 第117-118页 |
| 全文总结 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-128页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第128-129页 |
| 综述 | 第129-144页 |
| 参考文献 | 第139-144页 |
