| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第13-19页 |
| 引言 | 第19-24页 |
| 第一部分 焦虑患者及焦虑模型中TMEM74变化规律及关联性研究 | 第24-46页 |
| 1.1 实验材料及仪器 | 第24-29页 |
| 1.1.1 临床焦虑样本 | 第24-25页 |
| 1.1.2 实验动物 | 第25页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.4 实验仪器 | 第26-27页 |
| 1.1.5 溶液配制 | 第27-29页 |
| 1.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 1.2.1 组织总蛋白提取及定量 | 第29页 |
| 1.2.2 组织膜蛋白提取及定量 | 第29-30页 |
| 1.2.3 蛋白免疫印迹法 | 第30-31页 |
| 1.2.4 组织免疫荧光 | 第31页 |
| 1.2.5 小鼠BLA区脑立体定位注射 | 第31-32页 |
| 1.2.6 小鼠慢性束缚应激模型 | 第32页 |
| 1.2.7 小鼠行为学检测 | 第32-33页 |
| 1.2.8 数据统计 | 第33页 |
| 1.3 实验结果 | 第33-43页 |
| 1.3.1 候选TMEMs家族蛋白在体内分布及临床焦虑样本中表达情况 | 第33-37页 |
| 1.3.2 Tmem74在慢性应激焦虑模型小鼠中的表达变化规律 | 第37-40页 |
| 1.3.3 过表达Tmem74调控CIS小鼠焦虑样表型 | 第40-43页 |
| 1.4 讨论 | 第43-44页 |
| 1.5 结论 | 第44-46页 |
| 第二部分 Tmem74参与焦虑行为的表型调控及分子机制研究 | 第46-104页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第47-53页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第47页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第47页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第47-49页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第49-50页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第50-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-65页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第53-54页 |
| 2.2.2 Tmem74~(-/-)小鼠构建与鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2.3 行为学测试 | 第55-58页 |
| 2.2.4 sgRNA构建 | 第58页 |
| 2.2.5 质粒构建 | 第58-59页 |
| 2.2.6 RNA提取 | 第59-60页 |
| 2.2.7 Cas9小鼠BLA区脑立体定位注射 | 第60页 |
| 2.2.8 离体脑片的制备 | 第60-61页 |
| 2.2.9 电生理记录 | 第61-63页 |
| 2.2.10 Dil染色 | 第63-64页 |
| 2.2.11 免疫共沉淀 | 第64-65页 |
| 2.3 实验结果 | 第65-100页 |
| 2.3.1 Tmem74~(-/-)小鼠构建 | 第65-67页 |
| 2.3.2 Tmem74~(-/-)小鼠呈现焦虑样行为学表型 | 第67-74页 |
| 2.3.3 利用CRISPR-Cas9技术特异性敲除BLA脑区锥体神经元中Tmem74诱发小鼠焦虑表型 | 第74-78页 |
| 2.3.4 Tmem74敲除诱发BLA区锥体神经元兴奋性增加 | 第78-82页 |
| 2.3.5 Tmem74基因敲除对电压依赖Na~+和K~+电流无影响 | 第82-84页 |
| 2.3.6 Tmem74~(-/-)小鼠BLA区HCN通道功能受损 | 第84-89页 |
| 2.3.7 药物调控验证Tmem74经由HCN通道调控锥体神经元兴奋性及细胞膜特性 | 第89-91页 |
| 2.3.8 Tmem74在细胞膜上分布且依赖TM1跨膜段 | 第91-94页 |
| 2.3.9 Tmem74与HCN1存在直接相互作用 | 第94-98页 |
| 2.3.10 Tmem74经由TM1跨膜段调控HCN1介导的离子通道电流 | 第98-100页 |
| 2.4 讨论 | 第100-103页 |
| 2.5 结论 | 第103-104页 |
| 第三部分 调控BLA区锥体神经元Tmem74关联信号改善焦虑表型研究 | 第104-116页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第104-105页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第104-105页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第105页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第105页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第105页 |
| 3.2 实验方法 | 第105-106页 |
| 3.2.1 Tmem74过表达病毒注射 | 第105-106页 |
| 3.2.2 电生理记录 | 第106页 |
| 3.3 实验结果 | 第106-114页 |
| 3.3.1 Tmem74过表达腺相关病毒侵染及表达分布确认 | 第106-108页 |
| 3.3.2 调控Tmem74信号逆转锥体神经元的超兴奋性及损伤的HCN通道功能 | 第108-111页 |
| 3.3.3 特异性调控BLA区锥体神经元Tmem74信号能够改善小鼠焦虑表型 | 第111-114页 |
| 3.4 讨论 | 第114-115页 |
| 3.5 结论 | 第115-116页 |
| 总结与展望 | 第116-119页 |
| 参考文献 | 第119-129页 |
| 综述 | 第129-152页 |
| 参考文献 | 第141-152页 |
| 附录 | 第152-153页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第153-154页 |
