| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-27页 |
| 第一章 猪链球菌2型主要毒力因子研究进展 | 第15-23页 |
| 1、荚膜多糖(CPS) | 第15-16页 |
| 2、溶菌酶释放蛋白(MRP) | 第16-17页 |
| 3、细胞外蛋白因子(EF)与细胞外蛋白因子类似物(EF*) | 第17-18页 |
| 4、溶血素(SLY) | 第18-19页 |
| 5、未知蛋白质片段 | 第19页 |
| 6、粘附素 | 第19-20页 |
| 7、IgG结合蛋白 | 第20页 |
| 8、ORF2 | 第20-21页 |
| 9、谷氨酸脱氢酶(GDH) | 第21页 |
| 10、纤连蛋白(Fibronectin,Fn)和血纤蛋白原(Fibrinogen,Fgn)的结合蛋白(FBPS) | 第21页 |
| 11、不断发现中的新的毒力因子 | 第21-23页 |
| 第二章 猪链球菌分子生物学分型研究进展 | 第23-27页 |
| 1. MLST方法 | 第23-24页 |
| 2. RAPD分型 | 第24页 |
| 3. 核糖体分型 | 第24-25页 |
| 4. AFLP分型 | 第25页 |
| 5. PFGE方法 | 第25-26页 |
| 6. 国内猪链球菌分型研究现状 | 第26-27页 |
| 第二部分 实验研究 | 第27-56页 |
| 第一章 猪链球菌ELISA诊断方法建立及血清流行病学调查 | 第28-43页 |
| 1. 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·菌种、载体及血清 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-35页 |
| ·引物设计与合成 | 第28-29页 |
| ·细菌DNA的提取 | 第29页 |
| ·PCR扩增SAO与MRP基因 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第30页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第30-31页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第31-33页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·蛋白过柱纯化 | 第33-34页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第34页 |
| ·Western-blot分析重组蛋白反应原性 | 第34-35页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第35页 |
| ·浙江省猪链球菌血清流行病学调查 | 第35页 |
| 2. 结果 | 第35-41页 |
| ·PCR扩增SAO及MRP基因 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第36页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·Wetern-blot分析重组蛋白反应原性 | 第38-39页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第39-41页 |
| ·浙江省猪链球菌血清流行病学调查 | 第41页 |
| 3. 讨论 | 第41-43页 |
| 第二章 猪链球菌2型浙江省分离株分子流行病学调查 | 第43-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌株、载体与仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·引物设计与合成 | 第44页 |
| ·PCR扩增看家基因 | 第44-45页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第45-46页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第45页 |
| ·连接反应 | 第45页 |
| ·转化 | 第45页 |
| ·重组菌的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的测序 | 第46页 |
| ·序列分析 | 第46页 |
| 2. 结果 | 第46-55页 |
| ·靶基因核苷酸多态性和等位基因分析 | 第46-49页 |
| ·浙江省猪链球菌2型分子进化关系分析 | 第49-52页 |
| ·浙江省猪链球菌2型的分子分型及其与国外流行毒株相关性分析 | 第52-55页 |
| 3. 讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 附录 (看家基因进化树) | 第60-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
