| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 细胞自噬 | 第12-14页 |
| 1.1.1 细胞自噬的简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 自噬的生理功能 | 第13-14页 |
| 1.2 ULK1复合体 | 第14-19页 |
| 1.2.1 ULK1复合体的简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 ULK1复合体的组成 | 第15-16页 |
| 1.2.3 ULK1复合体的调控 | 第16-17页 |
| 1.2.4 ULK1复合体的生物学功能 | 第17-19页 |
| 1.3 对乙酰氨基酚(APAP) | 第19-22页 |
| 1.3.1 APAP的概述 | 第19页 |
| 1.3.2 APAP的代谢及毒副作用 | 第19-21页 |
| 1.3.3 自噬与APAP诱导肝损伤之间的关系 | 第21-22页 |
| 1.4 JNK通路 | 第22-25页 |
| 1.4.1 JNK通路的概述 | 第22-23页 |
| 1.4.2 JNK通路的调控 | 第23-25页 |
| 1.4.3 JNK通路的生物学意义 | 第25页 |
| 1.5 立题背景 | 第25-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-40页 |
| 2.1 DNA相关实验 | 第27-28页 |
| 2.1.1 表达质粒的构建 | 第27页 |
| 2.1.2 点突变质粒的构建 | 第27页 |
| 2.1.3 干扰RNA表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.1.4 腺病毒质粒的构建 | 第28页 |
| 2.2 抗体和试剂 | 第28-29页 |
| 2.3 细胞相关实验 | 第29-32页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第29页 |
| 2.3.2 瞬时转染 | 第29页 |
| 2.3.3 慢病毒包装 | 第29-30页 |
| 2.3.4 腺病毒的包装和纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.5 原代肝细胞的分离 | 第31页 |
| 2.3.6 细胞死亡的测定 | 第31-32页 |
| 2.4 蛋白质相关实验 | 第32-34页 |
| 2.4.1 His-ULK1蛋白质的表达和纯化 | 第32页 |
| 2.4.2 免疫沉淀法提取蛋白 | 第32-33页 |
| 2.4.3 体外磷酸化反应 | 第33页 |
| 2.4.4 免疫印迹 | 第33-34页 |
| 2.5 动物相关实验 | 第34-38页 |
| 2.5.1 小鼠的品系与饲养 | 第34-36页 |
| 2.5.2 ALT水平的测定 | 第36页 |
| 2.5.3 组织样品蛋白总裂解液的提取 | 第36-37页 |
| 2.5.4 EM样品处理 | 第37页 |
| 2.5.5 H&E染色 | 第37-38页 |
| 2.5.6 代谢指标的测定 | 第38页 |
| 2.6 统计分析 | 第38-40页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第40-71页 |
| 3.1 结果 | 第40-68页 |
| 3.1.1 肝脏特异性敲除Ulk1/2的小鼠会出现肝肿大的表型 | 第40-42页 |
| 3.1.2 肝脏缺失Ulk1/2表现出正常的自噬水平 | 第42-44页 |
| 3.1.3 Ulk11/2 LDKO小鼠血清和肝脏中的代谢指标的分析 | 第44-46页 |
| 3.1.4 肝脏特异性敲除UIk1/2的小鼠可以抵抗APAP诱导的肝损伤 | 第46-48页 |
| 3.1.5 肝脏特异性敲除Ulk1/2的小鼠抵抗APAP诱导的肝损伤不依赖于自噬的发生 | 第48-51页 |
| 3.1.6 肝脏组织中的Ulk1/2蛋白对于APAP引起的JNK的激活是必不可少的 | 第51-54页 |
| 3.1.7 肝细胞中Ulk1/2的缺失有效阻止了APAP诱导的JNK的激活和细胞死亡 | 第54-57页 |
| 3.1.8 JNK1/2的激酶MKK4/7是ULK1/2的直接底物 | 第57-61页 |
| 3.1.9 ULK1磷酸化MKK7的位点鉴定 | 第61-63页 |
| 3.1.10 APAP介导的内源MKK7-S403的磷酸化依赖于Ulk1/2 | 第63-64页 |
| 3.1.11 ULk1介导的MKK7的磷酸化对于APAP诱导的JNK的激活和细胞坏死过程有重要作用 | 第64-68页 |
| 3.2 讨论 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 图表索引 | 第86-89页 |
| 在学期间发表论文 | 第89页 |
