| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 多瘤病毒背景介绍 | 第11-14页 |
| 1.2 禽类多瘤病毒基因结构的研究 | 第14-16页 |
| 1.3 蛋白质多顺反子翻译起始机制 | 第16-18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第2章 分子克隆 | 第19-34页 |
| 2.1 构建克隆实验思路 | 第19-21页 |
| 2.1.1 禽类多瘤病毒APV-1 插入和突变型重组cDNA克隆构建 | 第19-20页 |
| 2.1.2 APV-1 晚期基因多顺反子的GFP标记载体构建和表达 | 第20-21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 仪器 | 第22页 |
| 2.3 分子克隆 | 第22-28页 |
| 2.3.1 质粒DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.2 电泳 | 第23页 |
| 2.3.3 转化 | 第23页 |
| 2.3.4 APV-1 的cDNA克隆pHL1003核苷酸全序列测序 | 第23-24页 |
| 2.3.5 重组型分子克隆的构建 | 第24-28页 |
| 2.4 实验结果分析 | 第28-34页 |
| 2.4.1 pHL1003限制性内切酶质粒图谱 | 第28页 |
| 2.4.2 插入片段克隆结果分析 | 第28-29页 |
| 2.4.3 1003-ACG和 1003-CTG突变克隆分析 | 第29-30页 |
| 2.4.4 GFP标记的pHL1003-GFP克隆分析 | 第30-31页 |
| 2.4.5 荧光标记突变型pHL1003+1-GFP和pHL1003+2-GFP克隆分析 | 第31-32页 |
| 2.4.6 重组克隆测序分析 | 第32-34页 |
| 第3章 蛋白表达 | 第34-52页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第34-35页 |
| 3.2 鸡胚和鹌鹑胚的成纤维细胞培养 | 第35-36页 |
| 3.3 禽类细胞的感染和转染 | 第36-37页 |
| 3.3.1 野生型病毒APV感染鸡胚细胞和鹌鹑胚细胞 | 第36页 |
| 3.3.2 转染重组病毒质粒DNA的制备 | 第36页 |
| 3.3.3 磷酸钙转染鸡胚和鹌鹑胚成纤维细胞 | 第36-37页 |
| 3.3.4 脂质体介导的重组病毒体DNA转染禽类成纤维细胞中 | 第37页 |
| 3.4 转染的重组型病毒在禽类成纤维细胞中蛋白量的表达 | 第37-39页 |
| 3.4.1 Western blot实验步骤 | 第37-39页 |
| 3.5 荧光标记重组克隆在禽类成纤维细胞中荧光表达 | 第39-40页 |
| 3.5.1 转染条件优化设计 | 第39页 |
| 3.5.2 实验结果统计分析 | 第39页 |
| 3.5.3 倒置荧光显微镜观察细胞的荧光表达 | 第39-40页 |
| 3.6 实验结果 | 第40-52页 |
| 3.6.1 细胞培养和病毒感染细胞图 | 第40-41页 |
| 3.6.2 cDNA转染鹌鹑胚成纤维细胞的条件优化结果 | 第41-46页 |
| 3.6.3 APV-1 晚期蛋白表达的Western bolt检测 | 第46-47页 |
| 3.6.4 荧光标记重组克隆荧光表达量检测 | 第47-48页 |
| 3.6.5 不同质粒在原代鹌鹑胚成纤维细胞中DNA转染表达率的比较 | 第48-50页 |
| 3.6.6 不同质粒在原代鸡胚成纤维细胞中DNA转染表达率的比较 | 第50-52页 |
| 第4章 讨论 | 第52-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
| 已发表文章 | 第62页 |
| 参与的科研课题 | 第62页 |
