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凡纳滨对虾NOS及相关因子的研究

摘要第4-6页
abstract第6-7页
第1章 引言第12-20页
    1.1 凡纳滨对虾概况第12页
    1.2 研究背景第12-18页
        1.2.1 温度对虾类的影响第13-14页
        1.2.2 抗氧化酶防御系统在对虾中的研究第14-16页
        1.2.3 一氧化氮合酶在对虾中的研究进展第16-18页
    1.3 本研究的目的及意义第18-20页
第2章 温度对氧代谢及能量代谢的影响第20-28页
    2.1 材料与方法第20-23页
        2.1.1 实验用虾第20页
        2.1.2 温度胁迫及取样第20页
        2.1.3 上清液制备第20页
        2.1.4 总蛋白含量测定第20-21页
        2.1.5 超氧阴离子O_2~(-.)含量测定第21页
        2.1.6 SOD活力测定第21页
        2.1.7 CAT活力测定第21页
        2.1.8 GSH含量测定第21-22页
        2.1.9 NOS活力测定第22页
        2.1.10 NO含量测定第22页
        2.1.11 ATP含量测定第22页
        2.1.12 数据分析第22-23页
    2.2 结果与分析第23-25页
        2.2.1 温度胁迫对O_2~(-.)产生及抗氧化酶活力的影响第23-24页
        2.2.2 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺NOS活力及NO含量的影响第24-25页
        2.2.3 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺ATP含量的影响第25页
    2.3 讨论第25-28页
第3章 凡纳滨对虾NOS基因RNAi研究第28-43页
    3.1 实验材料第28-29页
        3.1.1 实验用虾第28页
        3.1.2 实验试剂第28-29页
    3.2 实验方法第29-32页
        3.2.1 NOS基因NOsynthase结构域部分片段扩增及测序鉴定第29-30页
        3.2.2 含T7RNA聚合酶启动子序列DNA片段扩增及测序鉴定第30-31页
        3.2.3 dsRNA合成第31页
        3.2.4 凡纳滨对虾NOS基因RNA干扰实验第31-32页
        3.2.5 数据分析第32页
    3.3 实验结果第32-41页
        3.3.1 NOS基因NOsynthase结构域部分片段扩增及测序鉴定第32-33页
        3.3.2 含T7RNA聚合酶启动子序列DNA片段扩增及特异性检测结果第33页
        3.3.3 合成dsRNA电泳检测结果第33-34页
        3.3.4 凡纳滨对虾NOS基因RNAi研究结果第34-41页
    3.4 讨论第41-43页
第4章 对虾GC基因克隆与表达分析第43-54页
    4.1 实验材料第43-44页
        4.1.1 试验用虾第43页
        4.1.2 主要实验试剂第43-44页
    4.2 实验方法第44-46页
        4.2.1 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因cDNA克隆第44-45页
        4.2.2 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因组织表达及病原刺激表达分析第45-46页
        4.2.3 WSSV免疫刺激后肝胰腺NOS,NO及cGMP含量测定第46页
        4.2.4 数据分析及作图第46页
    4.3 实验结果第46-52页
        4.3.1 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因克隆与分析第46-49页
        4.3.2 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因半定量表达分析第49-50页
        4.3.3 WSSV免疫刺激后肝胰腺NOS,NO及cGMP含量测定结果第50-52页
    4.4 讨论第52-54页
第5章 NOS基因NO合成结构域表达与纯化第54-61页
    5.1 材料与方法第54-56页
        5.1.1 材料第54页
        5.1.2 实验方法第54-56页
    5.2 结果与分析第56-59页
        5.2.1 NOS基因NO合成结构域片段扩增与重组表达质粒鉴定第56-57页
        5.2.2 pET-32a(+)-NOS质粒在大肠杆菌BL21中的诱导表达分析第57-58页
        5.2.3 最适诱导时间摸索第58页
        5.2.4 最优诱导条件下pET-32a(+)-NOS重组蛋白纯化第58-59页
        5.2.5 纯化重组蛋白Westernblot分析第59页
    5.3 讨论第59-61页
第6章 对虾T7噬菌体展示文库构建第61-69页
    6.1 实验材料第61-62页
        6.1.1 实验用虾第61页
        6.1.2 试剂第61-62页
    6.2 实验方法第62-67页
        6.2.1 总RNA提取第62页
        6.2.2 分离纯化poly A~+mRNA第62页
        6.2.3 合成cDNA文库第62-63页
        6.2.4 双链cDNA末端修饰、接头连接及接头消化第63-64页
        6.2.5 cDNA大小片段的分离第64-65页
        6.2.6 cDNA与T7载体连接第65页
        6.2.7 连接产物体外包装第65页
        6.2.8 T7噬菌体cDNA文库的鉴定第65-66页
        6.2.9 T7噬菌体展示文库扩增第66-67页
    6.3 实验结果第67-68页
    6.4 讨论第68-69页
第7章 结论第69-70页
致谢第70-71页
参考文献第71-79页
在学期间发表的学术论文第79页

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