| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 凡纳滨对虾概况 | 第12页 |
| 1.2 研究背景 | 第12-18页 |
| 1.2.1 温度对虾类的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.2 抗氧化酶防御系统在对虾中的研究 | 第14-16页 |
| 1.2.3 一氧化氮合酶在对虾中的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 温度对氧代谢及能量代谢的影响 | 第20-28页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验用虾 | 第20页 |
| 2.1.2 温度胁迫及取样 | 第20页 |
| 2.1.3 上清液制备 | 第20页 |
| 2.1.4 总蛋白含量测定 | 第20-21页 |
| 2.1.5 超氧阴离子O_2~(-.)含量测定 | 第21页 |
| 2.1.6 SOD活力测定 | 第21页 |
| 2.1.7 CAT活力测定 | 第21页 |
| 2.1.8 GSH含量测定 | 第21-22页 |
| 2.1.9 NOS活力测定 | 第22页 |
| 2.1.10 NO含量测定 | 第22页 |
| 2.1.11 ATP含量测定 | 第22页 |
| 2.1.12 数据分析 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-25页 |
| 2.2.1 温度胁迫对O_2~(-.)产生及抗氧化酶活力的影响 | 第23-24页 |
| 2.2.2 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺NOS活力及NO含量的影响 | 第24-25页 |
| 2.2.3 温度胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺ATP含量的影响 | 第25页 |
| 2.3 讨论 | 第25-28页 |
| 第3章 凡纳滨对虾NOS基因RNAi研究 | 第28-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 实验用虾 | 第28页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 NOS基因NOsynthase结构域部分片段扩增及测序鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.2 含T7RNA聚合酶启动子序列DNA片段扩增及测序鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.3 dsRNA合成 | 第31页 |
| 3.2.4 凡纳滨对虾NOS基因RNA干扰实验 | 第31-32页 |
| 3.2.5 数据分析 | 第32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-41页 |
| 3.3.1 NOS基因NOsynthase结构域部分片段扩增及测序鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.2 含T7RNA聚合酶启动子序列DNA片段扩增及特异性检测结果 | 第33页 |
| 3.3.3 合成dsRNA电泳检测结果 | 第33-34页 |
| 3.3.4 凡纳滨对虾NOS基因RNAi研究结果 | 第34-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第4章 对虾GC基因克隆与表达分析 | 第43-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 试验用虾 | 第43页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因cDNA克隆 | 第44-45页 |
| 4.2.2 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因组织表达及病原刺激表达分析 | 第45-46页 |
| 4.2.3 WSSV免疫刺激后肝胰腺NOS,NO及cGMP含量测定 | 第46页 |
| 4.2.4 数据分析及作图 | 第46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-52页 |
| 4.3.1 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因克隆与分析 | 第46-49页 |
| 4.3.2 凡纳滨对虾LvGCⅢ基因半定量表达分析 | 第49-50页 |
| 4.3.3 WSSV免疫刺激后肝胰腺NOS,NO及cGMP含量测定结果 | 第50-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第5章 NOS基因NO合成结构域表达与纯化 | 第54-61页 |
| 5.1 材料与方法 | 第54-56页 |
| 5.1.1 材料 | 第54页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.2 结果与分析 | 第56-59页 |
| 5.2.1 NOS基因NO合成结构域片段扩增与重组表达质粒鉴定 | 第56-57页 |
| 5.2.2 pET-32a(+)-NOS质粒在大肠杆菌BL21中的诱导表达分析 | 第57-58页 |
| 5.2.3 最适诱导时间摸索 | 第58页 |
| 5.2.4 最优诱导条件下pET-32a(+)-NOS重组蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 5.2.5 纯化重组蛋白Westernblot分析 | 第59页 |
| 5.3 讨论 | 第59-61页 |
| 第6章 对虾T7噬菌体展示文库构建 | 第61-69页 |
| 6.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 6.1.1 实验用虾 | 第61页 |
| 6.1.2 试剂 | 第61-62页 |
| 6.2 实验方法 | 第62-67页 |
| 6.2.1 总RNA提取 | 第62页 |
| 6.2.2 分离纯化poly A~+mRNA | 第62页 |
| 6.2.3 合成cDNA文库 | 第62-63页 |
| 6.2.4 双链cDNA末端修饰、接头连接及接头消化 | 第63-64页 |
| 6.2.5 cDNA大小片段的分离 | 第64-65页 |
| 6.2.6 cDNA与T7载体连接 | 第65页 |
| 6.2.7 连接产物体外包装 | 第65页 |
| 6.2.8 T7噬菌体cDNA文库的鉴定 | 第65-66页 |
| 6.2.9 T7噬菌体展示文库扩增 | 第66-67页 |
| 6.3 实验结果 | 第67-68页 |
| 6.4 讨论 | 第68-69页 |
| 第7章 结论 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第79页 |
