| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-32页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 昆虫的嗅觉机制 | 第12-18页 |
| 1.2.1 引起昆虫嗅觉反应的气味分子 | 第12-13页 |
| 1.2.2 昆虫的嗅觉感受器 | 第13-14页 |
| 1.2.3 气味信号的识别和转运 | 第14-16页 |
| 1.2.4 气味信号的胞内加工 | 第16-17页 |
| 1.2.5 信号传导的终止 | 第17-18页 |
| 1.3 昆虫转基因技术 | 第18-23页 |
| 1.3.1 昆虫转座子 | 第18-22页 |
| 1.3.2 基于转座子的昆虫遗传转化体系的构建 | 第22-23页 |
| 1.4 基因组编辑技术 | 第23-30页 |
| 1.4.1 基因组编辑技术的原理 | 第24-25页 |
| 1.4.2 锌指核酸酶技术 | 第25-26页 |
| 1.4.3 转录激活样效应因子核酸酶技术 | 第26页 |
| 1.4.4 CRISPR/Cas基因编辑技术 | 第26-28页 |
| 1.4.5 三种基因组编辑技术的比较 | 第28-30页 |
| 1.4.6 CRISPR/Cas技术的发展和应用 | 第30页 |
| 1.5 本论文的研究意义、研究内容和技术路线 | 第30-32页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第30-31页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第31页 |
| 1.5.3 研究技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 家蚕嗅觉受体共受体Orco基因的功能研究 | 第32-53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-43页 |
| 2.1.1 家蚕品系及饲养条件 | 第32页 |
| 2.1.2 靶点设计和质粒构建 | 第32-35页 |
| 2.1.3 转基因注射 | 第35-36页 |
| 2.1.4 品系筛选 | 第36页 |
| 2.1.5 突变检测 | 第36-39页 |
| 2.1.6 家蚕Orco纯合突变体品系的构建 | 第39页 |
| 2.1.7 实时定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第39-41页 |
| 2.1.8 单感器记录(SSR) | 第41页 |
| 2.1.9 成虫交配行为测定 | 第41-42页 |
| 2.1.10 幼虫取食行为测定 | 第42-43页 |
| 2.2 结果与分析 | 第43-51页 |
| 2.2.1 转基因CRISPR/Cas9法获得BmOrco的突变体 | 第43-45页 |
| 2.2.2 BmOrco纯合突变体品系构建 | 第45-46页 |
| 2.2.3 BmOrco突变体性信息素识别相关基因的表达变化 | 第46-47页 |
| 2.2.4 BmOrco突变体的电生理反应 | 第47-48页 |
| 2.2.5 BmOrco突变体的交配行为 | 第48-50页 |
| 2.2.6 BmOrco突变体的取食行为 | 第50-51页 |
| 2.3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 家蚕幼虫取食相关嗅觉受体的功能研究 | 第53-78页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-66页 |
| 3.1.1 细胞表达质粒的构建 | 第53-55页 |
| 3.1.2 细胞系及细胞培养 | 第55-56页 |
| 3.1.3 细胞转染 | 第56-57页 |
| 3.1.4 转染细胞蛋白表达测定 | 第57-58页 |
| 3.1.5 细胞钙成像 | 第58-59页 |
| 3.1.6 家蚕品系及饲养条件 | 第59页 |
| 3.1.7 靶点设计 | 第59-60页 |
| 3.1.8 转基因质粒构建 | 第60-63页 |
| 3.1.9 piggyBac转座酶mRNA的合成 | 第63-64页 |
| 3.1.10 转基因注射 | 第64页 |
| 3.1.11 品系筛选及突变体的获得 | 第64页 |
| 3.1.12 突变检测 | 第64-65页 |
| 3.1.13 突变体取食行为测定 | 第65页 |
| 3.1.14 突变体蛋白表达半定量PCR和定量PCR分析 | 第65-66页 |
| 3.2 结果与分析 | 第66-77页 |
| 3.2.1 OR54、OR56与cis-jasmone的结合反应 | 第66-70页 |
| 3.2.2 BmOR54、BmOR56、BmOR54-OR56的突变体的获得 | 第70-72页 |
| 3.2.3 BmOR56突变体的取食行为 | 第72-74页 |
| 3.2.4 BmOR54突变体的取食行为 | 第74-75页 |
| 3.2.5 BmOR54-OR56突变体的取食行为 | 第75-76页 |
| 3.2.6 BmOR54、BmOR56、BmOR54-OR56三个突变体内OR54和OR56的表达变化 | 第76-77页 |
| 3.3 讨论 | 第77-78页 |
| 第四章 家蚕性信息素结合蛋白的功能研究 | 第78-108页 |
| 4.1 材料与方法 | 第78-92页 |
| 4.1.1 家蚕品系及饲养条件 | 第78页 |
| 4.1.2 靶点设计 | 第78页 |
| 4.1.3 转基因质粒构建 | 第78-84页 |
| 4.1.4 转基因注射 | 第84页 |
| 4.1.5 品系筛选及突变体的获得 | 第84页 |
| 4.1.6 突变检测 | 第84-85页 |
| 4.1.7 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第85-86页 |
| 4.1.8 RNAseq | 第86页 |
| 4.1.9 WesternBlotting | 第86-88页 |
| 4.1.10 单感器记录(SSR) | 第88页 |
| 4.1.11 成虫交配行为测定 | 第88页 |
| 4.1.12 PBPs蛋白的原核表达 | 第88-90页 |
| 4.1.13 ModifiedFar-westernBlotting | 第90-92页 |
| 4.2 结果与分析 | 第92-107页 |
| 4.2.1 家蚕三个PBPs的结构、分布及突变靶点 | 第92-93页 |
| 4.2.2 BmPBP1突变体的获得 | 第93-95页 |
| 4.2.3 BmPBP1突变体的电生理反应 | 第95页 |
| 4.2.4 BmPBP1突变体的交配行为 | 第95页 |
| 4.2.5 BmPBP1-PBP2突变体的获得 | 第95-98页 |
| 4.2.6 BmPBP1-PBP2突变体的电生理反应 | 第98页 |
| 4.2.7 BmPBP1-PBP2突变体的交配行为 | 第98页 |
| 4.2.8 BmPBP1-PBP2-PBP3突变体的获得 | 第98-101页 |
| 4.2.9 BmPBP1-PBP2-PBP3突变体的交配行为 | 第101-102页 |
| 4.2.10 BmPBP1突变体中基因的表达变化 | 第102-104页 |
| 4.2.11 BmPBP1突变体补偿效应的机制 | 第104-107页 |
| 4.3 讨论 | 第107-108页 |
| 第五章 总结与展望 | 第108-110页 |
| 附表 | 第110-122页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-147页 |
