| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 萜类化合物的简介 | 第14-15页 |
| 1.1.2 单萜的简介 | 第15页 |
| 1.1.3 香叶醇的简介 | 第15-16页 |
| 1.2 萜类化合物的合成途径 | 第16-18页 |
| 1.3 利用酿酒酵母合成香叶醇等单萜物质 | 第18-19页 |
| 1.4 香叶醇等单萜合成的瓶颈问题 | 第19-22页 |
| 1.4.1 关键前体供应不足限制了酿酒酵母高产单萜 | 第19-20页 |
| 1.4.2 酿酒酵母对单萜物质的耐受性差 | 第20-21页 |
| 1.4.3 内源性转化限制了酿酒酵母内单萜物质产量的提高 | 第21-22页 |
| 1.5 本论文研究的主要内容及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 外源乙酰辅酶A合成途径的表达对香叶醇产量的影响 | 第24-38页 |
| 前言 | 第24-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 培养基 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.2 菌株的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.3 PCR扩增DNA片段 | 第28页 |
| 2.2.4 PCR产物以及酶切产物的纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.2.5 酶切反应 | 第29页 |
| 2.2.6 质粒构建的方法 | 第29-30页 |
| 2.2.7 大肠杆菌的转化 | 第30页 |
| 2.2.8 大肠杆菌阳性转化子的筛选 | 第30页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.10 酿酒酵母转化 | 第31页 |
| 2.2.11 酿酒酵母质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.12 菌种保藏 | 第32页 |
| 2.2.13 细胞干重的测定 | 第32页 |
| 2.2.14 酿酒酵母菌株生长曲线的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.15 摇瓶发酵 | 第33页 |
| 2.2.16 中间代谢产物的分析 | 第33页 |
| 2.2.17 香叶醇的定量检测 | 第33-34页 |
| 2.2.18 香叶醇浓度标准曲线的制备 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-36页 |
| 2.3.1 引入柠檬酸裂解酶途径对酿酒酵母香叶醇产量及产率的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.2 引入柠檬酸裂解酶途径对菌株生长的影响 | 第36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 调控柠檬酸代谢途径强化乙酰辅酶A的合成 | 第38-53页 |
| 前言 | 第38-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 培养基 | 第39页 |
| 3.1.2 主要的酶与试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.2.1 质粒的构建 | 第40页 |
| 3.2.2 菌株的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.3 酿酒酵母基因敲除 | 第42页 |
| 3.2.4 酿酒酵母染色体整合目的基因片段 | 第42页 |
| 3.2.5 G418抗性基因(KanMX)的敲除 | 第42-43页 |
| 3.2.6 酿酒酵母染色体的提取 | 第43页 |
| 3.2.7 其它实验方法 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-50页 |
| 3.3.1 单基因敲除对酿酒酵母香叶醇产量及产率的影响 | 第43-46页 |
| 3.3.2 单基因敲除对菌株生长的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.3 双基因敲除对酿酒酵母香叶醇产量及产率的影响 | 第47-49页 |
| 3.3.4 双基因敲除对菌株生长的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-53页 |
| 第四章 强化柠檬酸转运和草酰乙酸再循环利用对香叶醇合成的影响 | 第53-60页 |
| 前言 | 第53-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 培养基 | 第54页 |
| 4.1.2 主要的酶与试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 质粒的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.2 菌株构建 | 第55-56页 |
| 4.2.3 其它实验方法 | 第56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 4.3.1 强化柠檬酸的转运及草酰乙酸的再循环利用对酿酒酵母香叶醇产量及产率的影响 | 第56-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第五章 全文总结及工作展望 | 第60-63页 |
| 5.1 全文总结 | 第60-61页 |
| 5.1.1 筛选不同来源的ACL | 第60页 |
| 5.1.2 筛选能够有效提高柠檬酸合成的靶点 | 第60页 |
| 5.1.3 强化柠檬酸途径和草酰乙酸的再循环利用 | 第60-61页 |
| 5.2 工作展望 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 研究生期间主要科研成果 | 第79页 |
