| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-16页 |
| 1.2 转氨酶与手性胺合成 | 第16-17页 |
| 1.3 脱氢酶 | 第17-18页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| 1.5 异二聚亲和多肽 | 第19页 |
| 1.6 课题研究思路 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 质粒与菌株 | 第21页 |
| 2.2 工具酶与试剂 | 第21-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第23-24页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| 2.3.3 DNA胶回收(Omega试剂盒) | 第25页 |
| 2.3.4 PCR产物快速回收 | 第25页 |
| 2.3.5 DH5α感受态制作(氯化钙法) | 第25-26页 |
| 2.3.6 转化(热激法) | 第26页 |
| 2.3.7 菌落PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.8 酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.9 重组蛋白的表达 | 第28页 |
| 2.3.10 纯化重组蛋白 | 第28-29页 |
| 2.3.11 蛋白质定量方法 | 第29页 |
| 2.3.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| 2.3.13 荧光猝灭实验 | 第30-31页 |
| 第三章 载体构建 | 第31-49页 |
| 3.1 本实验所使用的商业质粒 | 第31-32页 |
| 3.2 卷曲螺旋亲和多肽基因的合成 | 第32-33页 |
| 3.3 引物序列 | 第33页 |
| 3.4 主要溶液配制 | 第33-34页 |
| 3.5 pET28a-RTA-r载体构建 | 第34-37页 |
| 3.5.1 pET28a-RTA载体构建 | 第34-35页 |
| 3.5.2 pET28a-RTA-r载体构建 | 第35-37页 |
| 3.6 pETDuet-1-AlaDH-e与pET28a-FDH-r载体构建 | 第37-41页 |
| 3.6.1 pETDuet-1-AlaDH-e的载体构建 | 第38-39页 |
| 3.6.2 pET28a-FDH-r载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.7 结果分析 | 第41-47页 |
| 3.7.1 pET28a-RTA-r载体构建结果 | 第41-44页 |
| 3.7.2 pETDuet-1-AlaDH-e的载体构建结果 | 第44-46页 |
| 3.7.3 pET28a-FDH-r载体的构建结果 | 第46-47页 |
| 3.8 本章小节 | 第47-49页 |
| 第四章 酶的表达纯化 | 第49-57页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 常用溶液的成分与配制 | 第49页 |
| 4.3 酶的表达及纯化 | 第49-50页 |
| 4.4 结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.4.1 RTA-r蛋白的表达及纯化结果 | 第50-51页 |
| 4.4.2 AlaDH-e的表达及纯化结果 | 第51-53页 |
| 4.4.3 FDH-r的表达及纯化结果 | 第53-55页 |
| 4.5 本章小节 | 第55-57页 |
| 第五章 亲和多肽修饰建立多酶级联催化 | 第57-69页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 AlaDH-e与RTA-r/FDH-r的双酶自组装 | 第57-58页 |
| 5.3 不对称合成反应示意图 | 第58-59页 |
| 5.4 液相色谱法测定 | 第59-60页 |
| 5.4.1 液相色谱条件 | 第59页 |
| 5.4.2 具体操作流程 | 第59-60页 |
| 5.5 实验结果 | 第60-68页 |
| 5.5.1 非变性电泳 | 第60-61页 |
| 5.5.2 荧光猝灭实验 | 第61-65页 |
| 5.5.3 不同前手性酮底物转化率 | 第65-68页 |
| 5.6 本章小节 | 第68-69页 |
| 第六章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 6.1 结论 | 第69页 |
| 6.2 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 作者和导师简介 | 第81-83页 |
| 附件 | 第83-84页 |
