致谢 | 第4-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
1 文献综述 | 第9-18页 |
1.1 植物逆境胁迫和应对方式 | 第9页 |
1.1.1 植物逆境胁迫 | 第9页 |
1.1.2 植物应对逆境胁迫的方式 | 第9页 |
1.2 植物应对非生物胁迫的生理机制 | 第9-11页 |
1.2.1 直接作用物质 | 第10页 |
1.2.2 间接作用物质 | 第10-11页 |
1.3 钙信使及钙信号的传导 | 第11-14页 |
1.3.1 钙依赖蛋白激酶CDPKs | 第11-12页 |
1.3.2 钙调素CaM和类钙调素蛋白CmL | 第12页 |
1.3.3 CBLs蛋白及其靶蛋白CIPKs | 第12-14页 |
1.4 CBLs-CIPKs信号系统 | 第14-18页 |
1.4.1 CBLs-CIPKs信号网络的机制 | 第14页 |
1.4.2 CBLs-CIPKs信号系统的功能研究 | 第14-18页 |
2 引言 | 第18-19页 |
3 试验材料与方法 | 第19-29页 |
3.1 试验材料 | 第19-20页 |
3.1.1 植物材料和菌株 | 第19页 |
3.1.2 克隆载体 | 第19页 |
3.1.3 生化试剂和试剂盒 | 第19页 |
3.1.4 试验仪器 | 第19页 |
3.1.5 PCR引物 | 第19-20页 |
3.2 试验方法 | 第20-24页 |
3.2.1 RNA提取及反转录反应 | 第20-21页 |
3.2.2 目的基因克隆 | 第21-24页 |
3.3 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的生物信息学分析 | 第24页 |
3.4 TaCIPK5和TaCIPK8基因的表达水平分析 | 第24-25页 |
3.4.1 材料的处理 | 第24页 |
3.4.2 荧光引物的合成和RT-PCR反应 | 第24-25页 |
3.4.3 荧光实时定量PCR的结果分析 | 第25页 |
3.5 TaCBLs和TaCIPKs的酵母双杂交试验分析 | 第25-29页 |
3.5.1 酵母双杂交所用载体和菌株 | 第25页 |
3.5.2 试剂和培养基 | 第25-26页 |
3.5.3 目的基因和酵母双杂交表达载体的构建 | 第26页 |
3.5.4 酵母感受态细胞制备和重组质粒的转化及鉴定 | 第26-28页 |
3.5.5 融合蛋白自激活活性的测定 | 第28页 |
3.5.6 酵母双杂交及其蛋白相互作用的鉴定 | 第28-29页 |
4 结果与分析 | 第29-43页 |
4.1 RNA及cDNA检测 | 第29页 |
4.2 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的全长克隆 | 第29-30页 |
4.3 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的生物信息学分析 | 第30-35页 |
4.3.1 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的理化性质分析 | 第30页 |
4.3.2 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的疏水性/亲水性预测与分析 | 第30-31页 |
4.3.3 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的跨膜结构域预测 | 第31-32页 |
4.3.4 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的同源性分析 | 第32-33页 |
4.3.5 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白序列的功能结构域分析 | 第33-34页 |
4.3.6 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的磷酸化位点分析 | 第34-35页 |
4.4 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的表达分析 | 第35-38页 |
4.4.1 融解曲线分析 | 第35-36页 |
4.4.2 小麦TaCIPK5基因的表达分析 | 第36-37页 |
4.4.3 小麦TaCIPK8基因的表达分析 | 第37-38页 |
4.5 小麦TaCIPKs与TaCBLs蛋白的互作分析 | 第38-43页 |
4.5.1 酵母双杂交表达载体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
4.5.2 重组质粒转化及鉴定 | 第39-40页 |
4.5.3 融合蛋白毒性和自激活活性检测 | 第40-41页 |
4.5.4 TaCBLs与TaCIPKs相互作用鉴定 | 第41-43页 |
5 结论与讨论 | 第43-46页 |
5.1 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的克隆 | 第43页 |
5.2 TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的生物信息学分析 | 第43页 |
5.3 不同胁迫下TaCIPK5和TaCIPK8基因的表达分析 | 第43-44页 |
5.4 酵母双杂交试验检测TaCBLs和TaCIPKs基因的相互作用 | 第44-45页 |
5.5 全文结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-52页 |
ABSTRACT | 第52-53页 |
英文缩略表 | 第54页 |