| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-33页 |
| 1.1 动物microRNAs(miRNAs)的生物学特征 | 第16-21页 |
| 1.1.1 MiRNAs的生成 | 第16-17页 |
| 1.1.2 MiRNAs的序列及功能特点 | 第17-18页 |
| 1.1.3 MiRNAs调控下游基因表达的原理 | 第18-20页 |
| 1.1.4 调控miRNAs表达的分子机制 | 第20-21页 |
| 1.2 MiRNAs在动物生长、发育中的功能 | 第21-22页 |
| 1.2.1 MiRNAs调控个体发育的功能 | 第21页 |
| 1.2.2 MiRNAs调控哺乳动物组织发育的功能 | 第21页 |
| 1.2.3 MiRNAs对乳腺发育的调控作用 | 第21-22页 |
| 1.3 MiRNAs对脂质代谢的调控作用 | 第22-26页 |
| 1.3.1 MiRNAs调控肝脏脂质代谢 | 第22-24页 |
| 1.3.2 MiRNAs调控脂肪组织和细胞中的脂肪代谢 | 第24-25页 |
| 1.3.3 MiRNAs调控其它组织和细胞中的脂质代谢 | 第25-26页 |
| 1.4 乳腺组织乳脂代谢分子机制 | 第26-32页 |
| 1.4.1 乳脂肪与其它组织中脂肪的区别 | 第26页 |
| 1.4.2 山羊乳脂肪的组成特点及功能 | 第26-28页 |
| 1.4.3 牛和小鼠乳腺组织乳脂代谢分子机制 | 第28-31页 |
| 1.4.4 山羊乳脂代谢分子机制研究进展 | 第31-32页 |
| 1.5 MiRNAs调控乳腺乳脂代谢分子机制研究进展 | 第32页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第32-33页 |
| 第二章 山羊乳腺组织miRNAs测序、生物信息学分析 | 第33-47页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 2.1.1 主要试剂和仪器 | 第33页 |
| 2.1.2 动物样品采集、总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.1.3 Solexa测序 | 第34-35页 |
| 2.1.4 山羊乳腺组织miRNAs的生物信息学鉴定 | 第35-36页 |
| 2.1.5 山羊miRNAs特征分析 | 第36页 |
| 2.2 结果 | 第36-43页 |
| 2.2.1 总RNA样品检测结果 | 第36-37页 |
| 2.2.2 Solexa测序结果质量鉴定及小RNAs序列分析 | 第37-38页 |
| 2.2.3 山羊乳腺组织miRNAs序列分析 | 第38-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-46页 |
| 2.3.1 Solexa测序结果的质量 | 第43页 |
| 2.3.2 山羊乳腺组织小RNAs长度分布与功能 | 第43-44页 |
| 2.3.3 山羊miRNAs序列的生物信息学鉴定方法 | 第44页 |
| 2.3.4 山羊保守miRNAs的序列特征 | 第44-46页 |
| 2.4 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 泌乳中期和干奶期山羊乳腺组织差异表达miRNAs的筛选及功能预测 | 第47-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第47-53页 |
| 3.1.1 主要试剂和仪器 | 第47-48页 |
| 3.1.2 动物样品采集及总RNA提取 | 第48页 |
| 3.1.3 MiRNA cDNA合成与定量PCR | 第48-51页 |
| 3.1.4 MiRNAs靶基因预测、GO富集和KEGG通路分析 | 第51页 |
| 3.1.5 山羊乳腺上皮细胞的培养 | 第51-52页 |
| 3.1.6 催乳素试验及细胞总RNA提取 | 第52-53页 |
| 3.2 结果 | 第53-61页 |
| 3.2.1 山羊乳腺组织泌乳中期和干奶期miRNAs表达分析 | 第53-55页 |
| 3.2.2 差异表达miRNAs靶基因的功能预测 | 第55-57页 |
| 3.2.3 调控山羊乳脂代谢miRNAs的筛选 | 第57-61页 |
| 3.3 讨论 | 第61-62页 |
| 3.3.1 MiRNAs在不同动物乳腺组织中的表达情况 | 第61页 |
| 3.3.2 MiRNAs对乳腺发育和脂肪代谢的调控作用 | 第61页 |
| 3.3.3 激素对miRNAs表达的调节作用 | 第61-62页 |
| 3.4 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 腺病毒介导的miRNAs在乳腺上皮细胞中的过表达研究 | 第63-78页 |
| 4.1 材料与方法 | 第63-68页 |
| 4.1.1 腺病毒载体构建所用试剂、材料和仪器 | 第63页 |
| 4.1.2 细胞培养所用试剂、材料和仪器 | 第63-64页 |
| 4.1.3 腺病毒载体构建 | 第64-67页 |
| 4.1.4 腺病毒载体pAd-miRNAs在HEK293细胞株中的包装和扩繁 | 第67-68页 |
| 4.1.5 病毒感染乳腺上皮细胞 | 第68页 |
| 4.1.6 细胞核染色 | 第68页 |
| 4.2 结果 | 第68-76页 |
| 4.2.1 重组腺病毒质粒pAd-miRNAs的构建及鉴定 | 第68-71页 |
| 4.2.2 pAd-miRNA包装和病毒扩繁 | 第71页 |
| 4.2.3 腺病毒介导miRNAs在GMEC中的过表达 | 第71-76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-77页 |
| 4.4 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 MiR-103对山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢的调控作用研究 | 第78-94页 |
| 5.1 材料与方法 | 第78-84页 |
| 5.1.1 主要试剂和仪器 | 第78-79页 |
| 5.1.2 动物样品采集、总RNA提取 | 第79页 |
| 5.1.3 CDNA合成及定量PCR | 第79-82页 |
| 5.1.4 脂滴油红O染色 | 第82页 |
| 5.1.5 甘油三酯提取、含量测定 | 第82页 |
| 5.1.6 脂肪酸提取、含量测定 | 第82-83页 |
| 5.1.7 MiRNA inhibitor转染乳腺上皮细胞 | 第83页 |
| 5.1.8 相关性分析 | 第83-84页 |
| 5.2 结果 | 第84-91页 |
| 5.2.1 细胞中脂滴形态观察结果 | 第84页 |
| 5.2.2 甘油三酯含量测定结果 | 第84页 |
| 5.2.3 脂肪酸含量分析结果 | 第84-86页 |
| 5.2.4 乳脂生成相关基因mRNAs检测结果 | 第86-88页 |
| 5.2.5 其它乳脂代谢相关基因表达量检测结果 | 第88-89页 |
| 5.2.6 MiR-103表达量抑制试验 | 第89-90页 |
| 5.2.7 MiR-1031与泛酸酶基因(PANK3)表达量的关联分析 | 第90-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-93页 |
| 5.3.1 研究miR-103调控乳脂合成功能的重要性 | 第91-92页 |
| 5.3.2 MiR-103对脂肪脂解、β-氧化的调控作用 | 第92-93页 |
| 5.3.3 MiR-103-1与PANK3 | 第93页 |
| 5.4 小结 | 第93-94页 |
| 第六章 MiR-27a对山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢的调控作用研究 | 第94-104页 |
| 6.1 材料与方法 | 第94-96页 |
| 6.1.1 主要试剂和仪器 | 第94页 |
| 6.1.2 细胞总RNA提取、cDNA合成和定量PCR试验 | 第94页 |
| 6.1.3 油红O染色、甘油三酯含量测定及脂肪酸提取 | 第94-95页 |
| 6.1.4 Western blotting | 第95-96页 |
| 6.2 结果 | 第96-101页 |
| 6.2.1 细胞中脂滴形态观察结果 | 第96-97页 |
| 6.2.2 甘油三酯含量测定结果 | 第97页 |
| 6.2.3 脂肪酸含量分析结果 | 第97页 |
| 6.2.4 乳脂合成相关基因mRNAs定量检测结果 | 第97-99页 |
| 6.2.5 PPARγ表达量检测结果 | 第99-100页 |
| 6.2.6 脂肪分解和β-氧化相关基因表达量检测结果 | 第100-101页 |
| 6.3 讨论 | 第101-103页 |
| 6.3.1 MiR-27a对GMEC乳脂代谢的调控作用 | 第101页 |
| 6.3.2 过表达miR-27a对不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸比例的影响 | 第101-102页 |
| 6.3.3 PPARγ对下游基因的调控作用 | 第102-103页 |
| 6.3.4 GMEC中脂滴分布情况 | 第103页 |
| 6.4 小结 | 第103-104页 |
| 第七章 MiR-23a和miR-200a在山羊乳腺上皮细胞中的功能研究 | 第104-115页 |
| 7.1 材料与方法 | 第104-105页 |
| 7.1.1 主要试剂和仪器 | 第104页 |
| 7.1.2 动物样品采集、总RNA提取 | 第104页 |
| 7.1.3 细胞总RNA提取、cDNA合成和定量PCR | 第104-105页 |
| 7.1.4 油红O含量与甘油三酯含量分析 | 第105页 |
| 7.1.5 MiRNAs表达量之间的关联分析 | 第105页 |
| 7.2 结果 | 第105-111页 |
| 7.2.1 MiR-23a过表达对乳脂合成的影响 | 第105-107页 |
| 7.2.2 MiR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响 | 第107-108页 |
| 7.2.3 协同表达miRNAs的鉴定 | 第108-111页 |
| 7.3 讨论 | 第111-114页 |
| 7.3.1 过表达miR-23a对乳脂合成的影响 | 第111页 |
| 7.3.2 不同物种miR-200a的功能及其对GMEC乳脂代谢的影响 | 第111-112页 |
| 7.3.3 乳脂代谢分子网络的初步建立 | 第112-114页 |
| 7.4 小结 | 第114-115页 |
| 结论 | 第115-116页 |
| 本研究的创新点 | 第116-117页 |
| 存在问题及展望 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-133页 |
| 附录 | 第133-137页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 作者简介 | 第140页 |
