缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
英文摘要 | 第10-12页 |
前言 | 第13-14页 |
文献回顾 | 第14-24页 |
1 胃癌的研究背景 | 第14页 |
2 HMGB1 研究背景 | 第14-21页 |
3 HMGB1 与肿瘤研究现状 | 第21-22页 |
4 HMGB1 与胃癌的研究现状 | 第22页 |
5 本实验的研究目的及意义 | 第22-24页 |
实验一 HMGB1表达下调胃癌细胞系的建立及鉴定 | 第24-37页 |
1 材料 | 第24-26页 |
1.1 细胞系与质粒 | 第24页 |
1.2 主要试剂和仪器 | 第24-26页 |
2 方法 | 第26-32页 |
2.1 HMGB1基因RNAi慢病毒载体的构建 | 第26-28页 |
2.2 慢病毒小量包装及其滴度测定 | 第28-29页 |
2.3 胃癌细胞慢病毒感染 | 第29-31页 |
2.4 RT-PCR内源筛选有效靶点 | 第31-32页 |
2.5 Western blot实验检测HMGB1蛋白表达 | 第32页 |
3 结果 | 第32-35页 |
3.1 慢病毒干扰载体GV155HMGB1阳性克隆PCR鉴定 | 第32-33页 |
3.2 慢病毒干扰载体GV155HMGB1的DNA测序结果 | 第33页 |
3.3 慢病毒包装与病毒滴度测定 | 第33-34页 |
3.4 RT-PCR内源筛靶结果 | 第34-35页 |
3.5 Western blot验证结果 | 第35页 |
4 讨论 | 第35-37页 |
实验二 HMGB1表达下调对胃癌细胞生物学功能的影响 | 第37-46页 |
1 材料 | 第37-38页 |
1.1 研究对象 | 第37页 |
1.2 主要试剂和仪器 | 第37-38页 |
2 方法 | 第38-40页 |
2.1 胃癌细胞慢病毒感染 | 第38页 |
2.2 MTT实验 | 第38页 |
2.3 Brd U掺入实验 | 第38-39页 |
2.4 克隆形成实验 | 第39页 |
2.5 凋亡实验(Annexin V-APC单染法) | 第39页 |
2.6 细胞周期检测 | 第39-40页 |
2.7 Transwell实验 | 第40页 |
2.8 统计学处理 | 第40页 |
3 结果 | 第40-45页 |
3.1 HMGB1表达下调胃癌细胞的增殖显著降低 | 第40-42页 |
3.2 HMGB1表达下调胃癌细胞的克隆形率显著降低 | 第42页 |
3.3 HMGB1表达下调胃癌细胞的凋亡数增多 | 第42-43页 |
3.4 HMGB1表达下调胃癌细胞的S期细胞数明显减少 | 第43-44页 |
3.5 HMGB1表达下调胃癌细胞的迁移率降低 | 第44-45页 |
4 讨论 | 第45-46页 |
实验三 HMGB1表达下调胃癌细胞Affymetrix芯片检测分析 | 第46-57页 |
1 实验材料 | 第46-47页 |
1.1 研究对象 | 第46页 |
1.2 主要试剂和仪器 | 第46-47页 |
2 方法 | 第47-48页 |
2.1 样本总RNA质检 | 第47页 |
2.2 3’IVT反应 | 第47-48页 |
2.3 杂交 | 第48页 |
2.4 洗染及扫描 | 第48页 |
2.5 标准化方法及软件 | 第48页 |
2.6 Western blot实验验证下游基因 | 第48页 |
3 结果 | 第48-55页 |
3.1 质检结果 | 第48-49页 |
3.2 有显著差异表现的基因数目及目的基因表现。 | 第49-50页 |
3.3 聚类图 | 第50页 |
3.4 火山图 | 第50-51页 |
3.5 散点图 | 第51-52页 |
3.6 Pathway分析 | 第52-53页 |
3.7 深入分析结果 | 第53页 |
3.8 下游基因Western blot验证 | 第53-55页 |
4 讨论 | 第55-57页 |
小结 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-69页 |
个人简历和研究成果 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |