| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语索引 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-16页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.2 间充质干细胞的特性及展望 | 第12-13页 |
| 1.3 外泌体与疾病 | 第13-14页 |
| 1.4 脊髓损伤 | 第14-15页 |
| 1.5 神经营养因子-3研究进展 | 第15-16页 |
| 第二章 间充质干细胞的分离与培养 | 第16-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 实验所用细胞系 | 第17页 |
| 2.1.2 实验所有仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 间充质干细胞的分离 | 第19-22页 |
| 2.2.2 间充质干细胞的复苏 | 第22-23页 |
| 2.2.3 间充质干细胞的传代培养 | 第23页 |
| 2.2.4 间充质干细胞的冻存 | 第23页 |
| 2.2.5 间充质干细胞的分化 | 第23-25页 |
| 2.2.6 间充质干细胞的无血清培养 | 第25页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测hPMSCs的免疫表型 | 第25-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-31页 |
| 2.3.1 人胎盘间充质干细胞原代培养结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2 人胎盘来源间充质干细胞的生长特性 | 第27-28页 |
| 2.3.3 流式细胞仪鉴定hPMSCs免疫表型 | 第28-30页 |
| 2.3.4 hPMSc成脂、成骨、成软骨诱导分化 | 第30-31页 |
| 2.4 小结 | 第31页 |
| 第三章 间充质干细胞外泌体的纯化与鉴定 | 第31-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 间充质干细胞(MSCs)培养 | 第34页 |
| 3.2.2 复苏的间充质干细胞扩大培养 | 第34页 |
| 3.2.3 外泌体的纯化 | 第34-36页 |
| 3.2.4 BCA法测定外泌体蛋白浓度 | 第36页 |
| 3.2.5 Western Blot鉴定外泌体蛋白 | 第36-37页 |
| 3.2.6 透射电子显微镜鉴定外泌体结构 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 透射电镜下观察外泌体的结构 | 第38-39页 |
| 3.3.2 Western Blot鉴定 | 第39页 |
| 3.3.3 BCA测定外泌体蛋白的浓度 | 第39-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-42页 |
| 第四章 外泌体对脊髓损伤后的修复作用 | 第42-56页 |
| 引言 | 第42页 |
| 4.1 实验动物 | 第42页 |
| 4.2 实验材料 | 第42-44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 4.3.1 实验动物分组 | 第44页 |
| 4.3.2 大鼠脊髓背部全横断模型制备 | 第44-45页 |
| 4.3.3 大鼠行为学评估 | 第45-47页 |
| 4.3.4 免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 4.3.5 数据统计学处理 | 第48页 |
| 4.4 实验结果 | 第48-55页 |
| 4.4.1 外泌体的处理促进损伤脊髓再生 | 第48-49页 |
| 4.4.2 外泌体能够改善脊髓损伤大鼠的神经性疼痛和膀胱功能障碍 | 第49-51页 |
| 4.4.3 外泌体通过促进内源性神经干细胞的再生达到修复损伤的神经功能 | 第51-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 间充质干细胞过表达神经营养因子-3 | 第56-77页 |
| 引言 | 第56页 |
| 5.1 实验材料 | 第56-58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58-70页 |
| 5.2.1 NT3过表达技术路线 | 第58-59页 |
| 5.2.2 人源NT-3基因克隆 | 第59-61页 |
| 5.2.3 pLVX-EF1a-IRES-meCherry-NT-3载体的构建 | 第61-64页 |
| 5.2.4 慢病毒包装 | 第64-68页 |
| 5.2.5 细胞感染 | 第68页 |
| 5.2.6 病毒的感染效率 | 第68-69页 |
| 5.2.7 过表达NT-3细胞鉴定 | 第69页 |
| 5.2.8 细胞流式分选 | 第69-70页 |
| 5.3 实验结果 | 第70-76页 |
| 5.3.1 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry质粒载体构建 | 第70-75页 |
| 5.3.2 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry质粒载体的表达 | 第75-76页 |
| 5.4 小结 | 第76-77页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第77-79页 |
| 第七章 展望与挑战 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第91-93页 |
