| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 我国氮肥使用现状 | 第13-14页 |
| 1.2 倒伏的类型、原因及危害 | 第14-16页 |
| 1.2.1 植株倒伏的类型 | 第14页 |
| 1.2.2 影响倒伏的因素 | 第14-15页 |
| 1.2.3 倒伏带来的危害 | 第15-16页 |
| 1.3 木质素的生物合成 | 第16-21页 |
| 1.3.1 木质素合成的代谢途径 | 第16-19页 |
| 1.3.2 木质素的合成受转录因子调控 | 第19-20页 |
| 1.3.3 木质素的合成受miRNA调控 | 第20-21页 |
| 1.4 植物miRNA参与氮胁迫过程 | 第21-24页 |
| 1.4.1 miRNA能够改变根的生长发育 | 第21-22页 |
| 1.4.2 miRNA参与氮素吸收 | 第22页 |
| 1.4.3 miRNA参与次生代谢产物产生和自由基清除过程 | 第22-23页 |
| 1.4.4 玉米中参与氮胁迫的miRNA | 第23-24页 |
| 1.5 植物miR528研究进展 | 第24-25页 |
| 1.6 立题依据和技术路线 | 第25-27页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第25页 |
| 1.6.2 创新点和技术路线 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第27页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒与生化试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 实验所用引物及探针 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-47页 |
| 2.2.1 植物培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的基因 | 第31页 |
| 2.2.5 In-Fusion反应构建载体 | 第31-32页 |
| 2.2.6 烟草瞬时表达 | 第32页 |
| 2.2.7 5′-RACE | 第32页 |
| 2.2.8 Stem-loopRT-qPCR | 第32-33页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR | 第33页 |
| 2.2.10 小RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.11 小RNA探针的标记及效率检测 | 第34-35页 |
| 2.2.12 小RNA的分离及杂交 | 第35页 |
| 2.2.13 植物材料的固定包埋及石蜡切片的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.14 原位杂交 | 第36-40页 |
| 2.2.15 木质素染色 | 第40页 |
| 2.2.16 木质素含量测定 | 第40页 |
| 2.2.17 纤维素含量测定 | 第40-41页 |
| 2.2.18 半纤维素含量测定 | 第41页 |
| 2.2.19 茎杆穿刺强度测定 | 第41页 |
| 2.2.20 转录组测序 | 第41-42页 |
| 2.2.21 His融合蛋白的原核诱导表达及纯化 | 第42-44页 |
| 2.2.22 凝胶阻滞迁移实验 | 第44-45页 |
| 2.2.23 酵母单杂交 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-67页 |
| 3.1 氮素影响玉米苗期木质素组成和含量 | 第47-48页 |
| 3.2 ZmmiR528受氮调控 | 第48-49页 |
| 3.3 ZmLAC3和ZmLAC5是ZmmiR528的靶基因 | 第49-52页 |
| 3.4 ZmmiR528和ZmLACs主要在维管组织中表达 | 第52-53页 |
| 3.4.1 实时定量PCR检测ZmmiR528和ZmLACs的空间表达部位 | 第52-53页 |
| 3.4.2 原位杂交检测ZmmiR528和ZmLAC5的组织表达部位 | 第53页 |
| 3.5 高氮条件下ZmmiR528影响玉米倒伏性 | 第53-58页 |
| 3.5.1 玉米ZmmiR528转基因植株的构建 | 第53-54页 |
| 3.5.2 ZmmiR528影响玉米苗期体内木质素含量 | 第54-57页 |
| 3.5.3 ZmmiR528影响玉米成熟期倒伏性 | 第57-58页 |
| 3.6 过表达ZmLAC3能够增加玉米体内木质素含量 | 第58-60页 |
| 3.6.1 玉米ZmLAC3转基因植株的构建 | 第58-59页 |
| 3.6.2 过表达ZmLAC3增加玉米木质素含量 | 第59-60页 |
| 3.7 ZmmiR528和氮水平影响ZmPALs基因表达 | 第60-64页 |
| 3.7.1 ZmmiR528敲减植株转录组测序 | 第60-63页 |
| 3.7.2 ZmPALs基因受ZmmiR528和氮调控 | 第63-64页 |
| 3.8 ZmTGA4能够调控ZmmiR528b参与氮胁迫过程 | 第64-67页 |
| 3.8.1 ZmTGA4在酵母中的转录激活活性分析 | 第64-65页 |
| 3.8.2 EMSA验证ZmTGA4能够结合ZmmiR528b启动子 | 第65-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-70页 |
| 1、氮素影响玉米苗期木质素组成和含量 | 第67页 |
| 2、Zmmi R528 受氮供应水平调控 | 第67-68页 |
| 3、ZmLAC3 和 ZmLAC5 是 ZmmiR528 的靶基因 | 第68页 |
| 4、ZmmiR528 通过 ZmLACs 影响 ZmPALs 的表达，参与调节氮循环及木质素合成过程，进而影响高氮条件下玉米倒伏性 | 第68页 |
| 5、木质素生物合成过程中的转录后调控在单子叶和双子叶植物中是保守的 | 第68-69页 |
| 6、ZmmiR528 过表达玉米可用于生物能源的原材料 | 第69-70页 |
| 第五章 全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-83页 |
| 附录 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
