| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 课题的提出 | 第12-13页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第13-20页 |
| 1.2.1 水通道蛋白的基本性质 | 第14-16页 |
| 1.2.1.1 水通道蛋白的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.1.2 水通道蛋白的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 水通道蛋白的功能 | 第16-20页 |
| 1.2.2.1 水通道蛋白参与植物体内水分的运输 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 水通道蛋白参与气孔运动及光合作用 | 第17-18页 |
| 1.2.2.3 水通道蛋白对水分胁迫的应答 | 第18-20页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第20页 |
| 2 研究的主要内容 | 第20-22页 |
| 2.1 葡萄水分相关生理指标的测定 | 第20页 |
| 2.2 野生毛葡萄PIPs基因cDNA片段的克隆与序列分析 | 第20-21页 |
| 2.3 转录水平上分析毛葡萄PIPs基因的表达特性 | 第21页 |
| 2.4 毛葡萄水通道蛋白基因全长序列的克隆 | 第21页 |
| 2.5 野生毛葡萄水通道蛋白基因的功能验证 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-38页 |
| 3.1 试验材料 | 第22页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 3.1.2 主要试验仪器及设备 | 第22页 |
| 3.1.3 主要酶及化学试剂 | 第22页 |
| 3.2 试验设计与方法 | 第22-37页 |
| 3.2.1 材料培养与处理 | 第22-23页 |
| 3.2.2 水分相关生理指标的测定方法 | 第23-24页 |
| 3.2.2.1 叶片气孔导度和蒸腾速率的测定 | 第23页 |
| 3.2.2.2 叶片水势的测定 | 第23-24页 |
| 3.2.2.3 叶片相对含水量的测定 | 第24页 |
| 3.2.2.4 根、茎、叶质膜相对透性的测定 | 第24页 |
| 3.2.3 野生毛葡萄水通道蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析 | 第24-29页 |
| 3.2.3.1 葡萄总RNA的提取与纯化 | 第24-26页 |
| 3.2.3.2 cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| 3.2.3.3 野生毛葡萄VhPIPs基因cDNA片段的克隆 | 第26-27页 |
| 3.2.3.4 野生毛葡萄VhPIPs基因cDNA片段的回收 | 第27-28页 |
| 3.2.3.5 野生毛葡萄VhPIPs基因目的cDNA片段的连接 | 第28页 |
| 3.2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 3.2.3.7 连接产物的转化 | 第29页 |
| 3.2.3.8 连接产物菌落PCR验证 | 第29页 |
| 3.2.3.9 野生毛葡萄VhPIPs基因cDNA片段的测序 | 第29页 |
| 3.2.4 野生毛葡萄Vh PIPs基因全长的克隆 | 第29-32页 |
| 3.2.4.15'-RACE | 第29-31页 |
| 3.2.4.2 3'-RACE | 第31-32页 |
| 3.2.4.3 3'-，5'-RACE目的片段的回收及测序 | 第32页 |
| 3.2.4.4 cDNA中间片段、3'-RACE和 5'-RACE片段的拼接 | 第32页 |
| 3.2.4.5 Vh PIPs基因全长的分离及开放阅读框（ORF）的克隆 | 第32页 |
| 3.2.5 VhPIPs的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 3.2.6 野生毛葡萄Vh PIPs基因的表达模式分析 | 第33-34页 |
| 3.2.6.1 不同组织中的表达模式 | 第33页 |
| 3.2.6.2 干旱胁迫下的表达模式 | 第33-34页 |
| 3.2.7 超量表达目的基因拟南芥株系的获得 | 第34-36页 |
| 3.2.7.1 植物表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.7.2 超量表达载体对拟南芥的遗传转化 | 第35页 |
| 3.2.7.3 超量表达目的基因的拟南芥株系的筛选 | 第35-36页 |
| 3.2.8 转基因拟南芥干旱胁迫耐性分析 | 第36-37页 |
| 3.2.8.1 干旱胁迫下转基因拟南芥种子萌发和幼苗生长的观察 | 第36-37页 |
| 3.2.8.2 干旱胁迫下转基因拟南芥种子萌发和幼苗生长的观察 | 第37页 |
| 3.2.8.3 干旱胁迫下转基因拟南芥幼苗地上部分水势的测定 | 第37页 |
| 3.3 试验数据处理方法 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-83页 |
| 4.1 干旱胁迫过程中葡萄水分相关生理指标的变化 | 第38-43页 |
| 4.1.1 葡萄叶片蒸腾速率的变化 | 第38-39页 |
| 4.1.2 葡萄叶片气孔导度的变化 | 第39页 |
| 4.1.3 葡萄叶片水势的变化 | 第39-40页 |
| 4.1.4 葡萄叶片相对含水量的变化 | 第40-41页 |
| 4.1.5 葡萄根、茎、叶质膜透性的变化 | 第41-43页 |
| 4.2 野生毛葡萄VhPIPs基因的克隆 | 第43-46页 |
| 4.2.1 葡萄总RNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.2 Vh PIPs基因cDNA全长的克隆 | 第43-46页 |
| 4.3 野生毛葡萄VhPIPs的生物信息学分析 | 第46-54页 |
| 4.3.1 野生毛葡萄Vh PIPs基因的核苷酸序列对应的氨基酸序列 | 第46-48页 |
| 4.3.2 野生毛葡萄VhPIPs的理化性质分析 | 第48页 |
| 4.3.3 野生毛葡萄VhPIPs跨膜区及其信号肽预测 | 第48-49页 |
| 4.3.4 野生毛葡萄VhPIPs二级结构预测 | 第49页 |
| 4.3.5 野生毛葡萄VhPIPs的核苷酸及氨基酸序列比对 | 第49-52页 |
| 4.3.6 Vh PIPs 与其他植物 PIPs 的同源关系分析 | 第52-54页 |
| 4.4 葡萄PIPs基因表达模式分析 | 第54-66页 |
| 4.4.1 PIPs基因的组织特异性表达模式分析 | 第54-57页 |
| 4.4.2 PIPs基因在PEG-6000胁迫下的表达模式 | 第57-66页 |
| 4.4.2.1 根中PIPs基因在干旱胁迫下的表达 | 第57-60页 |
| 4.4.2.2 茎中PIPs基因在干旱胁迫下的表达 | 第60-63页 |
| 4.4.2.3 叶中PIPs基因在干旱胁迫下的表达 | 第63-66页 |
| 4.5 葡萄PIPs基因的表达与水分相关生理指标之间的相关性 | 第66-76页 |
| 4.5.1 根系PIPs的表达量与根系质膜透性之间的相关性 | 第66页 |
| 4.5.2 茎PIPs的表达量与茎质膜透性之间的相关性 | 第66页 |
| 4.5.3 叶片PIPs基因的表达量与叶片质膜透性之间的相关性 | 第66-67页 |
| 4.5.4 叶片PIPs的表达量与叶片相对含水量之间的相关性 | 第67页 |
| 4.5.5 叶PIPs的表达量与叶水势之间的相关性 | 第67-68页 |
| 4.5.6 叶片PIPs的表达量与叶片气孔导度之间的相关性 | 第68页 |
| 4.5.7 叶片中PIPs的表达量与叶片蒸腾速率之间的相关性 | 第68-76页 |
| 4.6 Vh PIPs基因在拟南芥中的过量表达研究 | 第76-83页 |
| 4.6.1 植物遗传表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 4.6.2 Vh PIP2;1 基因在拟南芥中的遗传转化及抗性筛选 | 第77页 |
| 4.6.3 转基因拟南芥的PCR筛选 | 第77-79页 |
| 4.6.4 转基因拟南芥的RT-PCR筛选 | 第79页 |
| 4.6.5 转基因拟南芥的qRT-PCR检测 | 第79-80页 |
| 4.6.6 转基因拟南芥的干旱胁迫耐性分析 | 第80-83页 |
| 4.6.6.1 Vh PIP2;1 的超量表达对拟南芥种子萌发和幼苗生长的影响 | 第80-82页 |
| 4.6.6.2 Vh PIP2;1 的超量表达对拟南芥幼苗地上部分水势的影响 | 第82-83页 |
| 5 讨论 | 第83-89页 |
| 5.1 野生毛葡萄PIPs的结构特征 | 第83页 |
| 5.2 不同抗旱性葡萄植株的水分状态 | 第83-84页 |
| 5.3 葡萄PIPs组织表达特性 | 第84-85页 |
| 5.4 葡萄PIPs与水分胁迫之间的关系 | 第85-87页 |
| 5.5 葡萄Vh PIP2;1 基因对干旱胁迫耐性的影响 | 第87-89页 |
| 6 结论 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献(References) | 第92-102页 |
| 缩写词（Abbreviations） | 第102-103页 |
| 附录 | 第103-105页 |
