| 第一部分 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第二部分 | 第9-16页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-16页 |
| 缩略语索引 | 第16-19页 |
| 第一部分 锌指蛋白ZFX在胶质瘤和非小细胞肺癌中的功能 | 第19-69页 |
| 第1章 前言 | 第19-27页 |
| 1.1 胶质瘤的简介 | 第19-23页 |
| 1.1.1 胶质瘤的起源 | 第19-21页 |
| 1.1.2 胶质瘤患者基因组的改变 | 第21-22页 |
| 1.1.3 胶质瘤相关的关键信号通路 | 第22页 |
| 1.1.4 胶质瘤的传统治疗方法 | 第22页 |
| 1.1.5 胶质瘤的基因治疗 | 第22-23页 |
| 1.2 非小细胞肺癌简介 | 第23-24页 |
| 1.2.1 非小细胞肺癌患者基因组的改变 | 第23页 |
| 1.2.2 非小细胞肺癌相关的关键信号通路 | 第23页 |
| 1.2.3 非小细胞肺癌治疗方法 | 第23-24页 |
| 1.2.4 非小细胞肺癌的基因治疗 | 第24页 |
| 1.3 ZFX的研究背景 | 第24-27页 |
| 1.3.1 Zfx基因的功能 | 第24-25页 |
| 1.3.2 ZFX与癌症 | 第25-27页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 细胞培养 | 第27页 |
| 2.2 胶质瘤临床组织样本收集 | 第27页 |
| 2.3 干扰质粒构建 | 第27-28页 |
| 2.4 干扰慢病毒颗粒的包装 | 第28-29页 |
| 2.5 有效shRNA筛选 | 第29页 |
| 2.6 定量PCR检测mRNA表达水平 | 第29-30页 |
| 2.7 蛋白样品的制备 | 第30页 |
| 2.8 细胞质和细胞核蛋白分离 | 第30页 |
| 2.9 蛋白的免疫印迹分析Western Blot | 第30-33页 |
| 2.9.1 配制聚丙烯酰胺凝胶 | 第30-31页 |
| 2.9.2 电泳 | 第31页 |
| 2.9.3 转膜 | 第31页 |
| 2.9.4 封闭 | 第31-32页 |
| 2.9.5 一抗孵育 | 第32页 |
| 2.9.6 二抗孵育 | 第32页 |
| 2.9.7 显影和胶片扫描 | 第32页 |
| 2.9.8 用到的抗体来源 | 第32-33页 |
| 2.10 免疫细胞化学 | 第33页 |
| 2.11 MTT法检测细胞增殖 | 第33页 |
| 2.11.1 MTT法的原理 | 第33页 |
| 2.11.2 MTT法实验过程 | 第33页 |
| 2.12 克隆形成分析 | 第33页 |
| 2.13 流式细胞术 | 第33-34页 |
| 2.14 衰老相关的β半乳糖糖苷酶染色 | 第34页 |
| 2.15 脑立体定位注射 | 第34-35页 |
| 2.16 裸鼠成瘤实验 | 第35页 |
| 2.16.1 皮下瘤的实验过程 | 第35页 |
| 2.16.2 脑原位瘤的实验过程 | 第35页 |
| 2.17 HE染色 | 第35-36页 |
| 2.18 TUNEL染色 | 第36页 |
| 2.19 划痕实验 | 第36页 |
| 2.20 数据统计 | 第36-37页 |
| 第3章 ZFX在胶质瘤中的功能 | 第37-54页 |
| 3.1 ZFX在胶质瘤细胞系中的表达情况 | 第37-40页 |
| 3.1.1 ZFX在人胶质瘤细胞中表达较多 | 第37页 |
| 3.1.2 ZFX在大鼠胶质瘤细胞系中表达较多 | 第37-38页 |
| 3.1.3 ZFX的不同的变体在胞浆和细胞核分布不同 | 第38页 |
| 3.1.4 130kDa条带是ZFX的糖基化形式 | 第38-39页 |
| 3.1.5 130kDa的ZFX变体表达量与胶质瘤的恶性程度正相关 | 第39-40页 |
| 3.2 携带针对ZFX的shRNA的慢病毒的有效性验证 | 第40-42页 |
| 3.2.1 定量PCR证明mRNA水平有效敲低ZFX | 第40-41页 |
| 3.2.2 Western Blot证明蛋白水平有效敲低ZFX | 第41-42页 |
| 3.3 敲低ZFX抑制胶质瘤细胞系U87和U373的增殖 | 第42-43页 |
| 3.3.1 MTT法证明敲低ZFX能显著抑制胶质瘤细胞系的增殖 | 第42页 |
| 3.3.2 克隆形成法证明敲低ZFX能显著抑制胶质瘤细胞系形成克隆 | 第42-43页 |
| 3.4 敲低ZFX导致胶质瘤细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期 | 第43-45页 |
| 3.4.1 U87细胞系的结果 | 第44页 |
| 3.4.2 U373细胞系的结果 | 第44-45页 |
| 3.5 敲低ZFX导致胶质瘤细胞的细胞凋亡加剧 | 第45-46页 |
| 3.5.1 U87细胞系的结果 | 第45页 |
| 3.5.2 U373细胞系的结果 | 第45-46页 |
| 3.6 敲低ZFX导致细胞衰老增多 | 第46页 |
| 3.7 细胞周期和凋亡相关蛋白表达情况 | 第46-47页 |
| 3.8 ZFX敲减对Akt信号通路的影响 | 第47页 |
| 3.9 ZFX敲减对MAPK/ERK信号通路的影响 | 第47-48页 |
| 3.10 ZFX敲减影响Akt、MAPK信号通路下游蛋白表达 | 第48页 |
| 3.11 裸鼠皮下瘤模型证明敲低ZFX能抑制肿瘤生长 | 第48-54页 |
| 3.11.1 肿瘤体积随时间增长对比 | 第49页 |
| 3.11.2 剥取的瘤的图片 | 第49-50页 |
| 3.11.3 剥取的瘤的重量 | 第50页 |
| 3.11.4 瘤的切片 | 第50-51页 |
| 3.11.5 瘤的体积 | 第51-52页 |
| 3.11.6 瘤的GFP阳性细胞对比 | 第52页 |
| 3.11.7 TUNEL染色 | 第52-54页 |
| 第4章 ZFX在肺癌中的功能 | 第54-65页 |
| 4.1 几种非小细胞肺癌细胞系的细胞内ZFX表达情况 | 第54页 |
| 4.2 慢病毒介导敲低ZFX的有效性验证 | 第54-56页 |
| 4.2.1 定量PCR证明在转录水平成功下调ZFX | 第54-55页 |
| 4.2.2 Western Blot证明在翻译水平成功下调ZFX | 第55-56页 |
| 4.2.3 免疫细胞化学染色证明在翻译水平成功下调ZFX | 第56页 |
| 4.3 敲低ZFX影响非小细胞肺癌细胞系H1299增殖 | 第56-58页 |
| 4.3.1 MTT法证明敲低ZFX能显著抑制H1299增殖 | 第56-57页 |
| 4.3.2 克隆形成法证明敲低ZFX能显著抑制H1299形成克隆 | 第57-58页 |
| 4.4 划痕实验证明敲低ZFX影响H1299的细胞迁移 | 第58-59页 |
| 4.5 敲低ZFX导致H1299细胞系的细胞周期阻滞在G0/G1期 | 第59-60页 |
| 4.6 敲低ZFX引起H1299细胞系凋亡细胞少量增加 | 第60页 |
| 4.7 敲低ZFX导致H1299细胞系衰老细胞增多 | 第60-61页 |
| 4.8 敲低ZFX对一些信号通路的影响 | 第61-63页 |
| 4.8.1 敲低ZFX对STAT3、Akt和MAPK信号通路的影响 | 第61页 |
| 4.8.2 敲低ZFX对细胞存活、迁移和细胞周期相关蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| 4.8.3 敲低ZFX对ATM磷酸化水平的影响 | 第62-63页 |
| 4.9 敲低ZFX对H1299细胞系形成裸鼠皮下瘤的影响 | 第63-65页 |
| 4.9.1 成瘤后裸鼠的照片 | 第63页 |
| 4.9.2 未荷瘤裸鼠数量随时间变化 | 第63-64页 |
| 4.9.3 肿瘤体积对比 | 第64-65页 |
| 第5章 讨论 | 第65-68页 |
| 第6章 结论 | 第68-69页 |
| 第二部分 PLCH1在小鼠焦虑和恐惧记忆中的功能 | 第69-90页 |
| 第1章 前言 | 第69-75页 |
| 1.1 PLC简介 | 第69-71页 |
| 1.1.1 PLC家族概述 | 第69页 |
| 1.1.2 PLC家族成员介绍 | 第69-71页 |
| 1.1.3 PLC家族蛋白的结构域简介 | 第71页 |
| 1.2 PLC家族基因与焦虑行为 | 第71-72页 |
| 1.2.1 PLC介导胆囊收缩素引起的焦虑样行为 | 第72页 |
| 1.2.2 PLCβ1和PLCβ4影响焦虑行为 | 第72页 |
| 1.3 PLCH1研究进展 | 第72-75页 |
| 1.3.1 PLCH1的鉴定 | 第72-73页 |
| 1.3.2 PLCH1的表达 | 第73页 |
| 1.3.3 PLCH1的功能 | 第73-75页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第75-81页 |
| 2.1 动物饲养与繁殖 | 第75-77页 |
| 2.1.1 动物来源与饲养 | 第75页 |
| 2.1.2 基因组抽提 | 第75-76页 |
| 2.1.3 基因型鉴定 | 第76-77页 |
| 2.2 转棒测试 | 第77页 |
| 2.3 开放旷场测试 | 第77-78页 |
| 2.4 高台十字迷宫 | 第78页 |
| 2.5 水迷宫 | 第78-80页 |
| 2.5.1 实验装置 | 第78页 |
| 2.5.2 空间记忆测试实验操作流程 | 第78-80页 |
| 2.6 场景恐惧测试 | 第80页 |
| 2.7 蛋白的免疫印迹分析Western Blot | 第80页 |
| 2.8 数据统计 | 第80-81页 |
| 第3章 实验结果 | 第81-88页 |
| 3.1 基因型鉴定显示成功敲除PLCH1 | 第81页 |
| 3.2 蛋白含量检测表明成功敲除PLCH1 | 第81-82页 |
| 3.3 转棒测试显示PLCH1敲除鼠平衡能力受损 | 第82页 |
| 3.4 开放场行为测试表明PLCH1敲除鼠有焦虑倾向 | 第82-84页 |
| 3.5 高台十字迷宫测试结果 | 第84-85页 |
| 3.6 场景恐惧检测结果 | 第85-86页 |
| 3.7 水迷宫测试结果 | 第86-88页 |
| 第4章 讨论 | 第88-89页 |
| 第5章 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 附录Ⅰ 在校期间发表文章和专利 | 第111页 |
