| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-27页 |
| 2 VBl对人肝癌Hep G2细胞生长及其诱导血管生成的影响 | 第27-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 细胞 | 第27页 |
| 2.1.2 药物 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器、器材 | 第27页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第28页 |
| 2.2.2 细胞的冻存、复苏和细胞计数 | 第28-29页 |
| 2.2.3 细胞增殖抑制试验(MTT法) | 第29-30页 |
| 2.2.4 平皿集落形成试验 | 第30页 |
| 2.2.5 软琼脂培养集落形成法 | 第30页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测细胞周期分布 | 第30-31页 |
| 2.2.7 内皮管结构形成试验 | 第31页 |
| 2.2.8 统计学处理 | 第31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-40页 |
| 2.3.1 VB1对人肝癌Hep G2细胞活性的影响 | 第31-33页 |
| 2.3.2 VB1对细胞平皿集落形成及软琼脂集落形成能力的影响 | 第33-37页 |
| 2.3.3 VB1对Hep G2细胞周期分布的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.4 VB1处理Hep G2细胞条件培养基对HUVECs细胞管结构形成的影响 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 2.5 结论 | 第43-44页 |
| 3 VB1对肝癌Hep G2细胞凋亡的影响 | 第44-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.1.1 细胞 | 第44页 |
| 3.1.2 药物 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器、器材 | 第44页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第45-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.2.1 PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率 | 第46页 |
| 3.2.2 ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片水平 | 第46-47页 |
| 3.2.3 DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA核小体间断裂 | 第47页 |
| 3.2.4 Caspase活性检测 | 第47-48页 |
| 3.2.5 统计学处理 | 第48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-56页 |
| 3.3.1 VB1对Hep G2细胞凋亡率的影响 | 第48-50页 |
| 3.3.2 VB1对Hep G2细胞组蛋白/DNA碎片水平的影响 | 第50页 |
| 3.3.3 VB1对Hep G2细胞DNA核小体间断裂的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 VB1对Hep G2细胞caspase-3活性的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.5 VB1对Hep G2细胞caspase-8活性的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.6 VB1对Hep G2细胞caspase-9活性的影响 | 第53页 |
| 3.3.7 Caspases抑制剂对VB1活化Hep G2细胞caspase-3的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.8 Caspases抑制剂对VB1活化Hep G2细胞caspase-8的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.9 Caspases抑制剂对VB1活化Hep G2细胞caspase-9的影响 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 3.5 结论 | 第58-59页 |
| 4 VB1诱导肝癌Hep G2细胞生长抑制及细胞凋亡作用机制研究 | 第59-102页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.1.1 细胞 | 第59页 |
| 4.1.2 药物 | 第59页 |
| 4.1.3 主要仪器、器材 | 第59-60页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第60页 |
| 4.1.5 抗体 | 第60-61页 |
| 4.1.6 靶基因siRNA的合成 | 第61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-66页 |
| 4.2.1 Western blot常用试剂配制 | 第61-62页 |
| 4.2.2 细胞处理 | 第62页 |
| 4.2.3 Western blot检测细胞中相关蛋白的表达 | 第62-64页 |
| 4.2.4 ELISA | 第64-65页 |
| 4.2.5 siRNA的转染 | 第65页 |
| 4.2.6 细胞增殖实验 | 第65-66页 |
| 4.2.7 细胞凋亡检测 | 第66页 |
| 4.2.8 统计学处理 | 第66页 |
| 4.3 实验结果 | 第66-98页 |
| 4.3.1 VB1对磷酸化PI3K和AKT蛋白表达的影响 | 第66-68页 |
| 4.3.2 VB1对MAPK信号分子磷酸化水平的影响 | 第68-73页 |
| 4.3.3 抑制AKT表达对VB1诱导细胞凋亡的影响 | 第73-75页 |
| 4.3.4 抑制AKT表达对VB1抑制细胞增殖的影响 | 第75页 |
| 4.3.5 抑制ERK1/2活性对VB1诱导细胞凋亡的影响 | 第75-77页 |
| 4.3.6 抑制ERK1/2活性对VB1抑制细胞增殖的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.7 VB1对磷酸化FOXO3a蛋白表达的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.8 FOXO3a特异性siRNA转染对Hep G2细胞FOXO3a蛋白的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.9 FOXO3a特异性siRNA转染对Hep G2细胞凋亡的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.10 FOXO3a特异性siRNA对VB1抑制肝癌细胞增殖的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.11 VB1对FOXO3a下游增殖相关靶蛋白表达的影响 | 第82-87页 |
| 4.3.12 VB1对FOXO3a下游凋亡相关靶蛋白表达的影响 | 第87-92页 |
| 4.3.13 VB1对Hep G2细胞VEGF合成和分泌的影响 | 第92-94页 |
| 4.3.14 抑制AKT表达对VB1活化Hep G2细胞FOXO3a的影响 | 第94-95页 |
| 4.3.15 抑制ERKl/2对VB1活化Hep G2细胞FOXO3a的影响 | 第95-96页 |
| 4.3.16 抑制FOXO3a对细胞AKT、ERK1/2表达的影响 | 第96-98页 |
| 4.4 讨论 | 第98-101页 |
| 4.5 结论 | 第101-102页 |
| 5 全文结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 综述 | 第113-125页 |
| 参考文献 | 第119-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第126页 |
