| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 英文缩略词表 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 第一章 TALE酶促进rDNA区定点整合研究 | 第18-46页 |
| 1.1 材料 | 第20-25页 |
| 1.1.1 引物 | 第20-21页 |
| 1.1.2 质粒 | 第21页 |
| 1.1.3 菌株、细胞 | 第21页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.1.5 耗材、试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.6 试剂配制 | 第23-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-34页 |
| 1.2.1 质粒的制备 | 第25-27页 |
| 1.2.2 gDNA及RNA的手工提取 | 第27页 |
| 1.2.3 构建pHr5468-GFP | 第27-28页 |
| 1.2.4 使用pHr5468-GFP打靶HEK293T | 第28页 |
| 1.2.5 TALENs/TALENickases细胞毒性检测 | 第28-29页 |
| 1.2.6 pHrnF9打靶HT1080 | 第29-30页 |
| 1.2.7 PCR初步检测定点整合 | 第30页 |
| 1.2.8 Southern blot检测定点整合 | 第30-33页 |
| 1.2.9 F9 Elisa | 第33-34页 |
| 1.3 结果 | 第34-42页 |
| 1.3.1 质粒的准备 | 第34-35页 |
| 1.3.2 pHr5468-GFP打靶HEK293T细胞 | 第35-37页 |
| 1.3.3 TALENs/TALENickases毒性检测 | 第37页 |
| 1.3.4 TALENs/TALENickases促进大片段的定点整合 | 第37-40页 |
| 1.3.5 定点整合后转基因的表达 | 第40-42页 |
| 1.4 讨论 | 第42-45页 |
| 1.5 结论 | 第45-46页 |
| 第二章 人凝血因子Ⅷ基因22号内含子倒位型iPSCs的原位修复研究 | 第46-92页 |
| 2.1 材料 | 第48-54页 |
| 2.1.1 引物 | 第48-49页 |
| 2.1.2 质粒 | 第49-50页 |
| 2.1.3 菌株、细胞、动物 | 第50页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第50-51页 |
| 2.1.5 耗材、试剂 | 第51-53页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第53-54页 |
| 2.2 方法 | 第54-73页 |
| 2.2.1 TALENs表达质粒的构建 | 第54-58页 |
| 2.2.2 原位修复质粒F8-22-PGK-Neo的构建 | 第58-60页 |
| 2.2.3 TALENs切割活性检测 | 第60-61页 |
| 2.2.4 尿液标本的采集 | 第61-62页 |
| 2.2.5 尿液细胞的培养及iPS细胞的诱导 | 第62-64页 |
| 2.2.6 MEF的准备 | 第64-65页 |
| 2.2.7 iPS细胞的培养及鉴定 | 第65-66页 |
| 2.2.8 F8-22-PGK-Neo打靶F8基因22号内含子倒位型iPSCs | 第66-67页 |
| 2.2.9 切除PGK-Neo表达框 | 第67-68页 |
| 2.2.10 F8-22-PGK-Neo打靶的鉴定 | 第68-69页 |
| 2.2.11 切除PGK-Neo鉴定 | 第69-70页 |
| 2.2.12 iPS细胞向内皮细胞的定向分化 | 第70-71页 |
| 2.2.13 CD31磁珠分选分化的内皮细胞 | 第71-72页 |
| 2.2.14 RT-PCR检测F8的表达 | 第72-73页 |
| 2.3 结果 | 第73-87页 |
| 2.3.1 TALENs表达质粒的构建 | 第73-76页 |
| 2.3.2 原位修复质粒F8-22-PGK-Neo的构建 | 第76-79页 |
| 2.3.3 TALENs切割活性检测 | 第79页 |
| 2.3.4 尿液细胞的培养及iPSCs的诱导 | 第79-80页 |
| 2.3.5 iPSC克隆干细胞特性检测 | 第80-81页 |
| 2.3.6 F8-22-PGK-Neo打靶F8基因22号内含子倒位型iPSCs | 第81-83页 |
| 2.3.7 切除PGK-Neo表达框 | 第83-85页 |
| 2.3.8 原位修复前后的iPSCs向内皮细胞的分化 | 第85-86页 |
| 2.3.9 原位修复后F8的表达 | 第86-87页 |
| 2.4 讨论 | 第87-91页 |
| 2.5 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 附录 | 第100-102页 |
| 附录1 甲型重度血友病患者尿液标本采集受试者须知 | 第100-101页 |
| 附录2 知情同意书 | 第101-102页 |
| 综述 | 第102-125页 |
| 参考文献 | 第116-125页 |
| 个人简介 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
