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SPARC调节糖酵解影响肝癌细胞对5-FU敏感性的研究

中文摘要第6-8页
英文摘要第8-9页
英文缩略词表第10-15页
第1章 绪论第15-22页
    1.1 课题研究的背景和意义第15-18页
    1.2 课题研究的侧重点第18-19页
    1.3 课题研究的具体内容第19-20页
    1.4 课题研究的创新性第20-21页
    1.5 技术路线图第21-22页
第2章 肝细胞癌中SPARC表达与糖酵解作用的相互关系第22-35页
    2.1 引言第22页
    2.2 材料第22-25页
        2.2.1 药品与试剂第22-23页
        2.2.2 实验用细胞第23-24页
        2.2.3 主要实验仪器与耗材第24-25页
    2.3 方法第25-29页
        2.3.1 细胞冻存与复苏第25页
        2.3.2 质粒/siRNA转染第25-27页
        2.3.3 Western blotting检测HepG2、Hep3B、Huh7细胞中SPARC/siRNA SPARC转染情况第27-28页
        2.3.4 比色法检测葡萄糖摄取量第28页
        2.3.5 比色法检测乳酸生成量第28-29页
    2.4 结果第29-33页
        2.4.1 Hep G2、Hep3B、Huh7细胞中SPARC转染后的表达情况第29-30页
        2.4.2 转染SPARC的HepG2、Hep3B、Huh7细胞中葡萄糖摄取和乳酸生成量的变化第30-31页
        2.4.3 Hep G2、Hep3B、Huh7细胞中si RNA SPARC转染后的表达情况第31页
        2.4.4 转染siRNA SPARC的HepG2、Hep3B、Huh7细胞中葡萄糖摄取和乳酸生成量的变化第31-33页
    2.5 讨论第33-34页
    2.6 小结第34-35页
第3章 肝细胞癌中SPARC调节糖酵解作用的分子机制第35-42页
    3.1 引言第35页
    3.2 材料第35-37页
        3.2.1 药品与试剂第35-36页
        3.2.2 实验用细胞第36页
        3.2.3 主要实验仪器与耗材第36-37页
    3.3 方法第37-39页
        3.3.1 转染第37页
        3.3.2 Western botting检测Glut1、HKⅡ、LDHA的表达水平第37-38页
        3.3.3 比色法检测LDH活性第38页
        3.3.4 比色法检测HK活性第38-39页
    3.4 结果第39-41页
        3.4.1 SPARC/siRNA SPARC转染入HepG2细胞后Glut1、HKⅡ、LDHA的表达变化第39-40页
        3.4.2 SPARC/si RNA SPARC 转染入 Hep G2 细胞后 HKⅡ的活性变化第40页
        3.4.3 SPARC/siRNA SPARC转染入HepG2细胞后LDHA的活性变化第40-41页
    3.5 讨论第41页
    3.6 小结第41-42页
第4章 缺糖环境下SPARC对肝癌细胞活力的影响第42-48页
    4.1 引言第42页
    4.2 材料第42-44页
        4.2.1 药品与试剂第42-43页
        4.2.2 实验用细胞第43页
        4.2.3 主要实验仪器与耗材第43-44页
    4.3 方法第44-45页
        4.3.1 转染第44页
        4.3.2 Western blotting检测AMPK、Thr-172 AMPK、SPARC的表达水平第44页
        4.3.3 台盼蓝拒染法测定细胞存活率第44-45页
    4.4 结果第45-46页
        4.4.1 SPARC或si RNA SPARC对低糖条件下Hep G2细胞存活率的影响第45-46页
        4.4.2 缺糖条件下HepG2细胞中SPARC表达与AMPK、Thr-172 AMPK表达的相互关系第46页
    4.5 讨论第46-47页
    4.6 小结第47-48页
第 5章 5-FU耐药的肝癌细胞中SPARC的表达与糖代谢作用的相互关系第48-62页
    5.1 引言第48-49页
    5.2 材料第49-51页
        5.2.1 药品与试剂第49-50页
        5.2.2 实验用细胞第50页
        5.2.3 主要实验仪器与耗材第50-51页
    5.3 方法第51-55页
        5.3.1 质粒/siRNA的转染第51页
        5.3.2 5-FU耐药细胞株的诱导第51-52页
        5.3.3 Western blotting实验第52页
        5.3.4 比色法检测葡萄糖摄取量第52页
        5.3.5 比色法乳酸生成量第52页
        5.3.6 台盼蓝拒染法测定细胞存活率第52页
        5.3.7 RT-PCR实验第52-55页
    5.4 结果第55-60页
        5.4.1 过表达SPARC的Hep G2细胞对 5-FU敏感性的变化第55-56页
        5.4.2 诱导形成的耐药HepG2细胞应用不同浓度梯度的 5-FU处理后细胞活力的变化第56-57页
        5.4.3 5-FU耐药的细胞中葡萄糖摄取量与乳酸生成量的变化第57页
        5.4.4 5-FU耐药的细胞中SPARC,Glut1,HKⅡ以及LDHA的表达变化第57-58页
        5.4.5 5-FU耐药的细胞中Glut1,HKⅡ,LDHA的mRNA水平变化第58页
        5.4.6 敲除糖酵解关键基因Glut1,HKⅡ,LDHA后耐药HepG2细胞对 5-FU的敏感性变化第58-60页
    5.5 讨论第60-61页
    5.6 小结第61-62页
第6章 SPARC提高耐药肝癌细胞对 5-FU敏感性作用的初步研究第62-69页
    6.1 引言第62页
    6.2 材料第62-64页
        6.2.1 药品与试剂第62-63页
        6.2.2 实验用细胞第63-64页
        6.2.3 主要实验仪器与耗材第64页
    6.3 方法第64-65页
        6.3.1 质粒/siRNA的转染第64-65页
        6.3.2 5-FU耐药细胞株的形成第65页
        6.3.3 Western blotting实验第65页
        6.3.4 台盼蓝拒染法测定细胞存活率第65页
    6.4 结果第65-68页
        6.4.1 过表达的SPARC在耐药肝癌细胞对 5-FU敏感性变化中的作用第65-66页
        6.4.2 耐药HepG2细胞共转染SPARC与Glut1(或HKⅡ,LDHA)后对 5-FU敏感性的变化第66-68页
    6.5 讨论第68页
    6.6 小结第68-69页
讨论第69-71页
结论第71-72页
参考文献第72-78页
致谢第78-80页
学术论文及科研成果附录第80页

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