| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-33页 |
| ·天然人血清白蛋白(HSA)性质与药理作用 | 第11-14页 |
| ·HSA 的合成 | 第11页 |
| ·HSA 的结构 | 第11-12页 |
| ·HSA 的理化性质 | 第12页 |
| ·HSA 的药理作用 | 第12-14页 |
| ·HSA 的应用和意义 | 第14页 |
| ·重组人血清白蛋白(rHSA)的表达与药理作用 | 第14-29页 |
| ·rHSA 的原核表达 | 第14-15页 |
| ·rHSA 的酵母表达 | 第15-28页 |
| ·rHSA 的其他系统表达 | 第28页 |
| ·rHSA 的药理作用 | 第28页 |
| ·rHSA 的应用前景和意义 | 第28-29页 |
| ·rHSA 的临床应用 | 第29-30页 |
| ·人造血液替代品 | 第29页 |
| ·促进药物的靶向作用 | 第29页 |
| ·作为辅助药剂 | 第29-30页 |
| ·与其他蛋白融合 | 第30页 |
| ·rHSA 的产业化研究进展 | 第30-31页 |
| ·本论文的意义和创新性 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-51页 |
| ·材料 | 第33-37页 |
| ·主要实验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂盒及试剂 | 第33页 |
| ·贮存液和培养基 | 第33-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-48页 |
| ·HSA 基因序列的设计 | 第37-39页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-HSA 的构建及鉴定 | 第39-41页 |
| ·重组表达质粒 pPICZa-A-HSA 的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母 X-33、GS115 及 SMD1168 的转化 | 第42-43页 |
| ·基因组 PCR 法鉴定阳性重组子 | 第43-44页 |
| ·不同 rHSA 工程菌表达情况检验及产物鉴定 | 第44-45页 |
| ·rHSA 酵母菌在摇瓶中的最佳表达条件试验 | 第45-46页 |
| ·rHSA 酵母菌的中试规模诱导表达 | 第46-48页 |
| ·分析方法 | 第48-51页 |
| ·菌体密度的测定 | 第48页 |
| ·菌体湿重、干重的测定 | 第48页 |
| ·甲醇浓度的测定 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第48-49页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第49-50页 |
| ·蛋白鉴定 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-65页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-HSA 鉴定结果 | 第51页 |
| ·重组表达质粒 pPICZa-A-HSA 鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·重组质粒转入毕赤酵母验证结果 | 第52-54页 |
| ·不同 rHSA 工程菌的表达结果及重组蛋白的鉴定结果 | 第54-58页 |
| ·不同 rHSA 工程菌的表达结果 | 第54-55页 |
| ·表达产物鉴定结果 | 第55-58页 |
| ·rHSA 酵母菌在摇瓶中条件优化结果 | 第58-61页 |
| ·体积、转速优化结果 | 第58页 |
| ·pH 优化结果 | 第58-59页 |
| ·温度优化结果 | 第59页 |
| ·甲醇浓度及添加次数优化结果 | 第59-60页 |
| ·不同盐离子浓度优化结果 | 第60-61页 |
| ·rHSA 酵母菌中试规模的条件优化结果 | 第61-65页 |
| ·培养基选择结果 | 第61-63页 |
| ·起始诱导菌体密度优化结果 | 第63页 |
| ·溶氧优化结果 | 第63页 |
| ·pH 优化结果 | 第63页 |
| ·温度优化结果 | 第63-64页 |
| ·甲醇浓度优化结果 | 第64页 |
| ·添加剂优化结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表论文 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
