| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-28页 |
| 综述一 禽源沙门氏菌与宿主相互作用的分子机制研究进展 | 第13-22页 |
| 1 禽源性沙门氏菌的致病机理 | 第13-15页 |
| 1.1 禽源性沙门氏菌的侵袭 | 第14页 |
| 1.2 禽源性沙门氏菌的全身性感染 | 第14页 |
| 1.3 禽源性沙门氏菌分泌的主要毒素 | 第14-15页 |
| 2 禽源性沙门氏菌与宿主细胞互作模式 | 第15-18页 |
| 2.1 肠道感染模式 | 第15-16页 |
| 2.2 巨噬细胞感染模式 | 第16-17页 |
| 2.3 生殖系统模式 | 第17-18页 |
| 3 禽源沙门氏菌感染的宿主防御机制 | 第18-21页 |
| 3.1 宿主的免疫应答 | 第18-19页 |
| 3.2 持续性慢性感染 | 第19-20页 |
| 3.3 宿主细胞凋亡与程序性死亡 | 第20-21页 |
| 4 研究展望 | 第21-22页 |
| 综述二 家禽生殖道先天性免疫研究进展 | 第22-28页 |
| 1 家禽生殖道的结构与功能 | 第22页 |
| 2 家禽生殖道免疫系统的组成 | 第22-25页 |
| 2.1 生殖道物理屏障 | 第22-23页 |
| 2.2 淋巴细胞 | 第23-24页 |
| 2.3 巨噬细胞 | 第24页 |
| 2.4 模式识别受体 | 第24页 |
| 2.5 抗菌肽 | 第24-25页 |
| 2.6 细胞因子和趋化因子 | 第25页 |
| 3 生殖道感染沙门氏菌的免疫应答 | 第25-26页 |
| 4 研究展望 | 第26-27页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 试验研究 | 第28-97页 |
| 第一章 SE人工感染鸭生殖道的动态分布及部分免疫指标检测 | 第28-51页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| 1.1 实验动物及菌株 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-35页 |
| 2.1 人工感染模型构建和组织样品采集 | 第29-30页 |
| 2.2 实验分组与评分 | 第30-31页 |
| 2.3 细菌分离及PCR检测 | 第31页 |
| 2.4 生殖道组织载菌量检测 | 第31页 |
| 2.5 产蛋性能和蛋品质分析 | 第31页 |
| 2.6 血清中T淋巴细胞、抗体效价、生殖激素指标的检测 | 第31-32页 |
| 2.7 肠炎沙门氏菌抗原的免疫组化定位 | 第32页 |
| 2.8 总RNA提取及cDNA合成 | 第32-33页 |
| 2.9 荧光定量PCR分析 | 第33-35页 |
| 2.10 统计分析 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-47页 |
| 3.1 实验动物模型构建与评分 | 第35-37页 |
| 3.2 生殖道不同部位SE PCR检测及载菌量分析 | 第37-38页 |
| 3.3 SE免疫组化定位 | 第38-40页 |
| 3.4 SE感染对蛋品质和产蛋性能影响 | 第40-41页 |
| 3.5 SE感染对鸭血清中T淋巴细胞、抗体滴度和生殖激素浓度的影响 | 第41-43页 |
| 3.6 SE感染对卵泡、基质、峡部和阴道组织免疫反应相关基因表达的影响 | 第43-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 第二章 基于RNA-seq筛选SE感染鸭卵巢的应答基因 | 第51-66页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 试验动物 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-56页 |
| 2.1 总RNA提取及检测 | 第52页 |
| 2.2 文库构建及转录组测序 | 第52页 |
| 2.3 原始数据统计分析及差异表达基因的筛选 | 第52-53页 |
| 2.4 差异表达基因的KEGG分析 | 第53-54页 |
| 2.5 荧光定量验证差异表达基因 | 第54-56页 |
| 3 结果 | 第56-64页 |
| 3.1 总RNA提取和质检结果 | 第56页 |
| 3.2 RNA-Seq数据的结果与分析 | 第56-59页 |
| 3.3 差异表达基因的筛选与鉴定 | 第59-61页 |
| 3.4 差异表达基因相关信号通路的富集 | 第61-62页 |
| 3.5 差异表达基因的实时荧光定量PCR验证 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 PERP在SE感染鸭卵泡颗粒细胞致凋亡作用研究 | 第66-81页 |
| 1 材料 | 第67页 |
| 1.1 试验动物及菌株 | 第67页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-72页 |
| 2.1 颗粒细胞的分离培养 | 第67页 |
| 2.2 过表达质粒构建及鉴定 | 第67-68页 |
| 2.3 siRNA干扰片段的合成与筛选 | 第68-69页 |
| 2.4 过表达和siRNA转染 | 第69页 |
| 2.5 RNA提取和荧光定量PCR | 第69-70页 |
| 2.6 Western Blot | 第70-71页 |
| 2.7 CCK-8细胞增殖分析 | 第71页 |
| 2.8 颗粒细胞凋亡的流式细胞分析(FACS) | 第71页 |
| 2.9 细菌黏附与侵袭试验 | 第71-72页 |
| 3 结果 | 第72-79页 |
| 3.1 颗粒细胞的分离与培养 | 第72页 |
| 3.2 SE感染鸭颗粒细胞后关键基因表达量变化 | 第72-73页 |
| 3.3 过表达质粒pEGFP-P2A-PERP的构建与鉴定 | 第73-74页 |
| 3.4 siRNA的干扰效率检测 | 第74-75页 |
| 3.5 PERP的过表达和siRNA靶向抑制 | 第75页 |
| 3.6 肠炎沙门氏菌体外感染实验 | 第75-77页 |
| 3.7 CCK8检测细胞增殖 | 第77页 |
| 3.8 FACS检测细胞凋亡 | 第77-78页 |
| 3.9 细菌黏附与侵袭量检测 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 第四章 PERP蛋白与肠炎沙门氏菌SipC蛋白相互作用研究 | 第81-97页 |
| 1 材料 | 第82页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第82页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-87页 |
| 2.1 sipC基因缺失株和回补株的构建 | 第82-83页 |
| 2.2 缺失株与回补株生长曲线测定 | 第83页 |
| 2.3 鸭卵泡颗粒细胞分离培养 | 第83页 |
| 2.4 构建鸭卵泡颗粒细胞的酵母双杂交cDNA文库 | 第83-85页 |
| 2.5 诱饵质粒pGBKT7-sipC构建及自激活活性检测 | 第85页 |
| 2.6 使用诱饵(Bait)与猎物(Prey)质粒共转化的酵母双杂交筛选 | 第85-86页 |
| 2.7 Prey质粒与Bait质粒互作验证 | 第86页 |
| 2.8 GST-pull down试验 | 第86-87页 |
| 2.9 瞬时转染 | 第87页 |
| 2.10 细菌黏附试验 | 第87页 |
| 3 结果 | 第87-95页 |
| 3.1 缺失株MY1△sipC和回补株MY1△sipC/psipC的构建与鉴定 | 第87-88页 |
| 3.2 野生株、突变株与回补株生长曲线测定 | 第88-89页 |
| 3.3 构建dGC酵母双杂交cDNA文库 | 第89-91页 |
| 3.4 构建pGBKT7-sipC诱饵质粒和自动激活检测 | 第91-92页 |
| 3.5 酵母双杂交筛选及互作验证 | 第92-94页 |
| 3.6 SipC与PERP互作验证 | 第94页 |
| 3.7过表达PERP促进S.Enteritidis的黏附鸭卵泡颗粒细胞 | 第94-95页 |
| 4 讨论 | 第95-97页 |
| 全文结论 | 第97-98页 |
| 主要创新点 | 第98页 |
| 进一步研究设想 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第115-116页 |
