| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 乙醇的主要应用 | 第12页 |
| 1.1.2 国内外燃料乙醇产业发展概况 | 第12-13页 |
| 1.1.3 乙醇的合成方法 | 第13-14页 |
| 1.1.4 乙醇发酵菌种 | 第14-15页 |
| 1.2 酿酒酵母优良菌种的选育方式 | 第15-20页 |
| 1.2.1 基因工程育种 | 第16页 |
| 1.2.2 代谢工程育种 | 第16-20页 |
| 1.2.2.1 传统的基因敲除组件构建 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 loxp-kanMX-loxp介导的酿酒酵母基因敲除技术 | 第17-18页 |
| 1.2.2.3 loxp-kanMX-loxp介导的酿酒酵母基因敲除技术的应用 | 第18-20页 |
| 1.3 课题介绍 | 第20-22页 |
| 1.3.1 本课题研究内容 | 第20-21页 |
| 1.3.2 本课题技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 酶和主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 培养条件 | 第23页 |
| 2.1.5 其他试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 菌株活化 | 第24页 |
| 2.2.2 菌株保藏 | 第24-25页 |
| 2.2.3 MF1015总DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.5 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 2.2.6 MF1015单倍体的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.7 TE/LiAc化学转化法 | 第27-28页 |
| 2.2.8 引物设计 | 第28-32页 |
| 2.2.8.1 酿酒酵母单双倍体验证引物的设计 | 第28页 |
| 2.2.8.2 adh2基因验证引物的设计 | 第28-30页 |
| 2.2.8.3 ald6基因验证引物的设计 | 第30页 |
| 2.2.8.4 引物列表 | 第30-32页 |
| 2.2.9 聚合酶链式反应(PCR) | 第32-36页 |
| 2.2.9.1 单双倍体验证 | 第32页 |
| 2.2.9.2 adh2基因验证 | 第32-33页 |
| 2.2.9.3 ald6基因验证 | 第33页 |
| 2.2.9.4 adh2外源基因敲除组件的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.9.5 ald6外源基因敲除组件的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.10 基因敲除 | 第35-36页 |
| 2.2.11 单倍体复倍为二倍体 | 第36-37页 |
| 2.2.12 生长曲线的测定 | 第37页 |
| 2.2.13 蔗糖发酵实验 | 第37-38页 |
| 2.2.14 糖蜜发酵实验 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-57页 |
| 3.1 实验结果 | 第39-57页 |
| 3.1.1 MF1015单倍体的制备 | 第39页 |
| 3.1.2 adh2基因完整性验证 | 第39-40页 |
| 3.1.3 ald6基因完整性验证 | 第40-41页 |
| 3.1.4 adh2外源基因敲除组件的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.5 ald6外源基因敲除组件的构建 | 第42页 |
| 3.1.6 adh2外源基因敲除组件的转化及转化子的筛选 | 第42-43页 |
| 3.1.7 ald6外源基因敲除组件的转化及转化子的筛选 | 第43-44页 |
| 3.1.8 酿酒酵母转化pSH65质粒 | 第44页 |
| 3.1.9 诱导消抗 | 第44-47页 |
| 3.1.10 传代丢失pSH65质粒 | 第47页 |
| 3.1.11 单倍体复倍为双倍体 | 第47-48页 |
| 3.1.12 MF1015-Δadh2菌株ald6基因的敲除 | 第48-50页 |
| 3.1.13 产孢培养基进行产孢验证 | 第50页 |
| 3.1.14 生长曲线 | 第50-51页 |
| 3.1.15 蔗糖发酵乙醇产量 | 第51-52页 |
| 3.1.16 蔗糖发酵乙酸产量 | 第52-53页 |
| 3.1.17 甘蔗糖蜜发酵乙醇产量 | 第53-54页 |
| 3.1.18 甘蔗糖蜜发酵乙酸产量 | 第54-55页 |
| 3.1.19 甘蔗糖蜜发酵总糖剩余量 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 结论 | 第59-60页 |
| 5.2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第70页 |
