摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一章 前言 | 第11-24页 |
1.1 红树林生态系统(Mangrove ecosystem) | 第11-12页 |
1.2 海洋微生物天然产物 | 第12-15页 |
1.3 二酮哌嗪类化合物(Diketopiperazines,DKPS) | 第15-17页 |
1.4 异戊烯化二酮哌嗪类化合物生物合成途径 | 第17-21页 |
1.4.1 烟曲霉毒素(Fumitremorgin)生物合成途径 | 第17-18页 |
1.4.2 异烟棒曲霉素(Roquefortine)生物合成途径 | 第18-21页 |
1.4.3 Acetylaszonalenin 生物合成途径 | 第21页 |
1.5 Drimentines 类化合物研究进展 | 第21-24页 |
第二章 Streptomyces sp. OUC6819 基因组中 NRPS 基因(簇)的生物信息学分析 | 第24-33页 |
2.1 引言 | 第24-25页 |
2.2 实验方法 | 第25页 |
2.3 实验结果 | 第25-32页 |
2.3.1 Streptomyces sp. OUC6819 基因组中 NRPS 基因(簇) | 第25-27页 |
2.3.2 NRPS 基因(簇)中腺苷化功能结构域(A domain)的底物特异性分析 | 第27-32页 |
2.3.2.1 A1-A10 核心序列分析 | 第27-29页 |
2.3.2.2 Specificity-conferring code 分析 | 第29-32页 |
2.4 本章小结 | 第32-33页 |
第三章 Drimentines 生物合成关键酶基因的克隆与表达 | 第33-59页 |
3.1 引言 | 第33-37页 |
3.2 实验材料 | 第37-42页 |
3.2.1 菌株及质粒 | 第37-38页 |
3.2.2 本实验中所用引物见表 | 第38-39页 |
3.2.3 主要实验仪器 | 第39页 |
3.2.4 实验试剂 | 第39页 |
3.2.5 培养基与缓冲液配方 | 第39-42页 |
3.3 实验方法 | 第42-52页 |
3.3.1 菌种保藏 | 第42页 |
3.3.2 大肠杆菌质粒的快速提取 | 第42页 |
3.3.3 碱裂解法质粒提取步骤 | 第42-43页 |
3.3.4 质粒提取试剂盒(OMEGA 质粒小提试剂盒) | 第43页 |
3.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第43-44页 |
3.3.6 目的基因扩增 | 第44-45页 |
3.3.7 胶回收(试剂盒) | 第45页 |
3.3.8 DNA 的纯化(试剂盒法) | 第45-46页 |
3.3.9 酶切、链接反应 | 第46-47页 |
3.3.10 感受态的制备(电转) | 第47-48页 |
3.3.11 蛋白表达 | 第48页 |
3.3.12 蛋白纯化 | 第48-49页 |
3.3.13 Millipore 超滤管蛋白浓缩与缓冲液置换 | 第49页 |
3.3.14 Tricine-SDS-PAGE | 第49-51页 |
3.3.15 Laemmli-SDS-PAGE | 第51-52页 |
3.4 实验结果 | 第52-58页 |
3.4.1 Drimentines 生物合成关键酶基因的克隆 | 第52-57页 |
3.4.1.1 Drimentines 生物合成基因 driD 的克隆 | 第53-54页 |
3.4.1.2 Drimentines 生物合成基因 driP 的克隆 | 第54页 |
3.4.1.3 Drimentines 生物合成基因 driO 的克隆 | 第54-56页 |
3.4.1.4 Drimentines 生物合成基因 driN、driK 的克隆 | 第56-57页 |
3.4.2 Drimentines 生物合成关键酶的表达与纯化 | 第57-58页 |
3.5 本章小结 | 第58-59页 |
第四章 酰基载体蛋白 DriN 功能研究 | 第59-67页 |
4.1 引言 | 第59-61页 |
4.2 实验材料 | 第61页 |
4.2.1 实验试剂 | 第61页 |
4.2.2 实验仪器 | 第61页 |
4.3 实验方法 | 第61-62页 |
4.3.1 蛋白浓度测定 | 第61页 |
4.3.2 酰基载体蛋白体外磷酸泛酰巯基乙胺化 | 第61-62页 |
4.3.3 HPLC 检测分析 DriN | 第62页 |
4.3.4 MS 检测分子量变化 | 第62页 |
4.4 实验结果 | 第62-66页 |
4.4.1 酰基载体蛋白 DriN 序列分析 | 第62-63页 |
4.4.2 DriN 蛋白浓度测定 | 第63-64页 |
4.4.3 DriN 活性检测 | 第64-65页 |
4.4.4 MS 分析 | 第65-66页 |
4.5 本章小结 | 第66-67页 |
第五章 辅酶 A 连接酶 DriM 功能研究 | 第67-72页 |
5.1 引言 | 第67-68页 |
5.2 实验材料 | 第68页 |
5.3 实验方法 | 第68-69页 |
5.4 实验结果 | 第69-71页 |
5.4.1 DriM 底物特异性分析 | 第69页 |
5.4.2 DriM 活性测定 | 第69-71页 |
5.5 本章小结 | 第71-72页 |
第六章 总结与展望 | 第72-74页 |
6.1 本研究工作总结 | 第72-73页 |
6.2 主要创新点 | 第73页 |
6.3 Drimentines 生物合成研究工作展望 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-84页 |
致谢 | 第84-85页 |
符号简写 | 第85-86页 |