| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-28页 |
| 1.1 菌寄生真菌几丁质酶研究现状 | 第12-19页 |
| 1.1.1 微生物几丁质酶基因 | 第13-15页 |
| 1.1.2 菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆和表达 | 第15-17页 |
| 1.1.3 几丁质酶基因结构与植物抗病反应中的作用 | 第17-19页 |
| 1.2 超氧化物歧化酶的研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 超氧化物歧化酶的结构和理化特性 | 第19-22页 |
| 1.2.1.1 超氧化物歧化酶的分类和结构 | 第19-21页 |
| 1.2.1.2 超氧化物歧化酶基因的克隆和表达 | 第21-22页 |
| 1.2.2 超氧化物歧化酶基因与植物抗逆反应 | 第22-24页 |
| 1.3 水稻转基因研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4 选题的目的意义、研究内容和技术路线 | 第25-28页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第25-26页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第26-27页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-47页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-33页 |
| 2.1.1 材料 | 第28-33页 |
| 2.1.1.1 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.1.1.2 酶和生化试剂 | 第28页 |
| 2.1.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.1.4 培养基 | 第28-30页 |
| 2.1.1.5 溶液配制 | 第30-33页 |
| 2.2 粉红聚端孢(T.roseum)trchil、疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)zjmnsod及嗜热子囊菌光孢变种(T.levisporus)esjmnsod基因的克隆 | 第33-36页 |
| 2.2.1 PCR引物设计 | 第33页 |
| 2.2.2 PCR扩增trchil和两种Mnsod基因 | 第33-34页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶纯化特异DNA片断 | 第34页 |
| 2.2.4 与载体连接 | 第34-35页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2.2.5.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第35页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌感受态的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.6 菌落PCR检测 | 第36页 |
| 2.2.7 序列测定 | 第36页 |
| 2.3 三种基因在水稻中的转化及抗性研究 | 第36-47页 |
| 2.3.1 转水稻表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.3.1.1 提取质粒 | 第37-38页 |
| 2.3.1.2 质粒DNA的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.2 转化农杆菌(EHA105) | 第39-40页 |
| 2.3.2.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.3.2.2 DNA直接转化农杆菌 | 第39-40页 |
| 2.3.2.3 重组农杆菌鉴定 | 第40页 |
| 2.3.3 农杆菌介导法转化水稻 | 第40-42页 |
| 2.3.3.1 愈伤诱导 | 第40页 |
| 2.3.3.2 愈伤继代 | 第40-41页 |
| 2.3.3.3 预培养 | 第41页 |
| 2.3.3.4 农杆菌准备 | 第41页 |
| 2.3.3.5 农杆菌悬浮培养准备 | 第41页 |
| 2.3.3.6 农杆菌侵染(共培养) | 第41页 |
| 2.3.3.7 水洗和筛选 | 第41-42页 |
| 2.3.3.8 预分化与分化 | 第42页 |
| 2.3.3.9 生根 | 第42页 |
| 2.3.3.10 移栽 | 第42页 |
| 2.3.4 转基因水稻植株的分子生物学检测 | 第42-47页 |
| 2.3.4.1 水稻基因组提取 | 第42-43页 |
| 2.3.4.2 转基因植株的PCR检测 | 第43页 |
| 2.3.4.3 转基因水稻植株RT-PCR检测 | 第43-44页 |
| 2.3.4.3.1 总RNA的提取(Trizol法) | 第43-44页 |
| 2.3.4.3.2 紫外检测RNA产率和纯度 | 第44页 |
| 2.3.4.3.3 反转录反应 | 第44页 |
| 2.3.4.4 转基因植株的荧光定量PCR检测 | 第44-45页 |
| 2.3.4.5 酶活性的测定 | 第45-46页 |
| 2.3.4.5.1 转基因水稻几丁质酶活性的测定 | 第45页 |
| 2.3.4.5.2 转基因水稻Mnsod酶活性的测定 | 第45-46页 |
| 2.3.4.6 转基因水稻的抗性检测 | 第46-47页 |
| 2.3.4.6.1 转基因水稻抗除草剂检测 | 第46页 |
| 2.3.4.6.2 转粉红聚端孢几丁质酶基因抗水稻纹枯病菌AGl-IA的检测 | 第46页 |
| 2.3.4.6.3 转两种Mnsod基因抗盐性检测 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-74页 |
| 3.1 粉红聚端孢(T.roseum)trchil、疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种(T.levisporus)esjmnsod基因的克隆 | 第47-50页 |
| 3.1.1 粉红聚端孢Trchil的克隆 | 第47-48页 |
| 3.1.2 疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod基因的克隆 | 第48-49页 |
| 3.1.3 嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod的克隆 | 第49-50页 |
| 3.2 粉红聚端孢trchil、疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod基因在水稻中的转化 | 第50-66页 |
| 3.2.1 粉红聚端孢trchil、疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod基因在水稻中的转化 | 第50-53页 |
| 3.2.2 转化农杆菌 | 第53-56页 |
| 3.2.3 农杆菌介导法转化水稻 | 第56-58页 |
| 3.2.4 转基因水稻的分子检测 | 第58-66页 |
| 3.3 转粉红聚端孢trchil、疏绵状嗜热丝孢菌zjmnsod和嗜热子囊菌光孢变种esjmnsod基因水稻的抗性分析 | 第66-74页 |
| 3.3.1 转粉红聚端孢trchil基因水稻抗性分析 | 第66-68页 |
| 3.3.1.1 转粉红聚端孢trchil基因水稻除草剂抗性检测 | 第66页 |
| 3.3.1.2 转粉红聚端孢trchil基因水稻对纹枯病的抗性 | 第66-68页 |
| 3.3.2 转疏绵状嗜热丝孢菌zjmsod基因和转嗜热子囊光孢变种esjmnsod基因水稻抗性分析 | 第68-74页 |
| 3.3.2.1 转疏绵状嗜热丝孢菌zjmsod基因和转嗜热子囊光孢变种esjmnsod基因水稻除草剂抗性检测 | 第68页 |
| 3.3.2.2 盐胁迫对转疏绵状嗜热丝孢菌zjmsod基因和转嗜热子囊光孢变种esjmnsod基因水稻种子萌发的影响 | 第68-70页 |
| 3.3.2.3 盐胁迫对转疏绵状嗜热丝孢菌zjmsod基因和转嗜热子囊光孢变种esjmnsod基因水稻根伸长的影响 | 第70-71页 |
| 3.3.2.4 盐胁迫下转zjmnsod基因水稻SOD活性测定 | 第71-72页 |
| 3.3.2.5 盐胁迫下转esjmnsod基因水稻SOD活性测定 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| 4.1 转几丁质酶基因对纹枯病的抗性 | 第74-75页 |
| 4.2 转嗜热真菌sod基因水稻对盐胁迫的抗性 | 第75-76页 |
| 4.3 水稻组织培养研究 | 第76-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
