| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 专业名称縮写中英文对照表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-16页 |
| 1.1 人胚胎干细胞 | 第12页 |
| 1.2 人胚胎干细胞自我更新的维持 | 第12页 |
| 1.3 人胚胎干细胞自我更新相关基因的研究方法 | 第12-13页 |
| 1.4 推测CHD1L可能参与人胚胎干细胞的自我更新 | 第13-15页 |
| 1.4.1 CHD1L基因的结构 | 第13页 |
| 1.4.2 CHD1L的功能 | 第13-14页 |
| 1.4.3 CHD1L与胚胎干细胞的自我更新 | 第14-15页 |
| 1.5 研究CHD1L与人胚胎干细胞的自我更新的技术路线 | 第15-16页 |
| 2 研究材料、试剂和耗材 | 第16-20页 |
| 2.1 细胞和质粒载体 | 第16页 |
| 2.2 细胞培养试剂 | 第16页 |
| 2.3 分子实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.4 实验用耗材 | 第17-18页 |
| 2.5 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.6 引物列表 | 第19-20页 |
| 3 实验技术和方法 | 第20-28页 |
| 3.1 Gateway克隆方法 | 第20页 |
| 3.1.1 利用高保真酶克隆目的基因的ORF片段 | 第20页 |
| 3.1.2 BP克隆方法 | 第20页 |
| 3.1.3 LR克隆方法 | 第20页 |
| 3.1.4 连接产物的转化 | 第20页 |
| 3.2 质粒DNA的抽提 | 第20-21页 |
| 3.3 慢病毒颗粒包装 | 第21页 |
| 3.4 人胚胎干细胞培养 | 第21-22页 |
| 3.4.1 小鼠的Feeder支持下的hESCs培养方法 | 第21-22页 |
| 3.4.2 hESCs的无饲养层培养体系 | 第22页 |
| 3.4.3 培养基配方 | 第22页 |
| 3.5 RNA的抽提和cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 3.5.1 RNA的抽提步骤 | 第22页 |
| 3.5.2 cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 3.6 PCR检测 | 第23页 |
| 3.7 realtime-PCR检测 | 第23页 |
| 3.8 免疫荧光染色 | 第23-24页 |
| 3.9 Western blot检测蛋白表达 | 第24-28页 |
| 3.9.1 Western blot实验所需试剂配方 | 第24页 |
| 3.9.2 细胞总蛋白质的提取 | 第24-25页 |
| 3.9.3 测量所提蛋白质的浓度 | 第25页 |
| 3.9.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第25-26页 |
| 3.9.5 转膜(半干转)和封闭 | 第26页 |
| 3.9.6 抗体杂交 | 第26-27页 |
| 3.9.7 ECL化学发光显影 | 第27-28页 |
| 4 实验结果 | 第28-55页 |
| 4.1 CHD1L在人ESC和分化后细胞中的表达 | 第28-34页 |
| 4.1.1 CHD1L在人ESC和成纤维细胞中的表达 | 第28-30页 |
| 4.1.2 CHD1L在人ESC的EB分化中的表达变化 | 第30-34页 |
| 4.2 CHD1L过表达和敲减质粒载体的构建 | 第34-40页 |
| 4.2.1 构建CHD1L的诱导表达慢病毒质粒载体 | 第34-37页 |
| 4.2.2 构建CHD1L诱导敲减的慢病毒质粒载体 | 第37-40页 |
| 4.3 CHD1L过表达和敲减的人胚胎干细胞系的建立和鉴定 | 第40-46页 |
| 4.3.1 过表达和敲减CI-ID1L的人ESC系的建立过程 | 第40-43页 |
| 4.3.2 过表达和敲减CHD1L的ES细胞系进行鉴定 | 第43-46页 |
| 4.4 CHD1L敲减和过表达影响人ESC的自我更新 | 第46-47页 |
| 4.5 敲减和过表达CHD1L后对人ESC增殖的影响 | 第47-48页 |
| 4.6 人ESC中过表达和敲减CHD1L后自我更新和多能性相关基因的表达 | 第48-51页 |
| 4.7 CHD1L敲减和过表达对人ESC的EB分化的影响 | 第51-55页 |
| 5 讨论 | 第55-58页 |
| 5.1 CHD1L在hESC和分化后细胞中表达的比较 | 第55页 |
| 5.2 hESC中敲减和过表达CHD1L均抑制其自我更新 | 第55-56页 |
| 5.3 hESC中敲减和过表达CHD1L后抑制细胞的增殖 | 第56页 |
| 5.4 hESC在过表达抑制多能性和自我更新相关基因的表达 | 第56页 |
| 5.5 在hESC的EB分化中敲减和过表达CHD1L | 第56-58页 |
| 6 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 综述 | 第62-67页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
