| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-31页 |
| 第一章 体细胞诱导重编程的研究进展 | 第13-26页 |
| 1.1 体细胞诱导重编程 | 第13-23页 |
| 1.1.1 体细胞诱导重编程的发展史 | 第13-14页 |
| 1.1.2 体细胞诱导重编程机制 | 第14-23页 |
| 1.1.2.1 对重编程阶段的研究 | 第14-16页 |
| 1.1.2.2 表观遗传修饰 | 第16-17页 |
| 1.1.2.3 染色质结构重组 | 第17-19页 |
| 1.1.2.4 OSKM 的作用 | 第19-21页 |
| 1.1.2.5 转录因子化学剂量 | 第21-22页 |
| 1.1.2.6 重编程标记物 | 第22-23页 |
| 1.2 猪体细胞诱导重编程的进展 | 第23-26页 |
| 第二章 TetO 诱导表达系统的研究进展 | 第26-31页 |
| 2.1 TetO 诱导表达系统 | 第26-29页 |
| 2.1.1 Tet-off 诱导表达系统 | 第26页 |
| 2.1.2 Tet-on 诱导表达系统 | 第26-27页 |
| 2.1.3 Tet 诱导表达系统的改进 | 第27-29页 |
| 2.1.3.1 对 tTA/rtTA 的改造 | 第27-28页 |
| 2.1.3.2 提高 TetO 系统的严密性 | 第28页 |
| 2.1.3.3 对诱导药物的优化 | 第28-29页 |
| 2.2 TetO 诱导表达系统在体细胞重编程中的应用 | 第29-31页 |
| 试验研究 | 第31-50页 |
| 第三章 TetO 诱导表达载体的功能验证 | 第31-38页 |
| 3.1 材料和方法： | 第31-34页 |
| 3.1.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1.1 细胞与慢病毒载体 | 第31页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 3.1.2 方法： | 第32-34页 |
| 3.1.2.1 主要溶液配制 | 第32页 |
| 3.1.2.2 TetO-FUW-OSKM 和 FUW-M2rtTA 质粒鉴定及制备 | 第32-34页 |
| 3.1.2.3 慢病毒制备及感染 | 第34页 |
| 3.1.2.4 RNA 的提取 | 第34页 |
| 3.1.2.5 PCR 检测 | 第34页 |
| 3.2 结果 | 第34-36页 |
| 3.2.1 慢病毒质粒鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.2 TetO 诱导表达系统的功能验证 | 第35-36页 |
| 3.3 讨论 | 第36-37页 |
| 3.4 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 建立 TetO 诱导重编程一代细胞系及其功能检测 | 第38-45页 |
| 4.1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 4.1.1 材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1.1 动物组织材料 | 第38页 |
| 4.1.1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 4.1.1.3 主要仪器 | 第39页 |
| 4.1.2 方法 | 第39-41页 |
| 4.1.2.1 主要溶液配制 | 第39页 |
| 4.1.2.2 PEF 的分离 | 第39-40页 |
| 4.1.2.3 MEF 的分离 | 第40页 |
| 4.1.2.4 饲养层(feeder)的制备 | 第40页 |
| 4.1.2.5 TetO 诱导重编程猪体细胞 | 第40页 |
| 4.1.2.6 外源基因插入检测 | 第40页 |
| 4.1.2.7 AP 染色 | 第40-41页 |
| 4.2 结果 | 第41-43页 |
| 4.2.1 分离得到猪胎儿成纤维细胞(PEF) | 第41页 |
| 4.2.2 猪胎儿成纤维细胞诱导重编程 | 第41-42页 |
| 4.2.3 外源基因插入与表达检测 | 第42-43页 |
| 4.3 讨论 | 第43-44页 |
| 4.4 小结 | 第44-45页 |
| 第五章 利用 TetO-PEF 细胞进行 DOX 诱导 iPSCs 的研究 | 第45-50页 |
| 5.1 材料和方法 | 第45-46页 |
| 5.1.1 材料 | 第45页 |
| 5.1.1.1 主要试剂 | 第45页 |
| 5.1.1.2 主要仪器 | 第45页 |
| 5.1.2 方法 | 第45-46页 |
| 5.1.2.1 主要溶液配制 | 第45页 |
| 5.1.2.2 分化成纤维细胞 | 第45-46页 |
| 5.1.2.3 重编程为二代 iPSCs | 第46页 |
| 5.1.2.4 免疫荧光染色 | 第46页 |
| 5.2 结果 | 第46-48页 |
| 5.2.1 获得 TetO-PEF 细胞 | 第46-47页 |
| 5.2.2 TetO-PEF 重编程为二代 iPSCs | 第47-48页 |
| 5.2.3 免疫荧光染色结果 | 第48页 |
| 5.3 讨论 | 第48-49页 |
| 5.4 小结 | 第49-50页 |
| 总结 | 第50-51页 |
| 本研究的创新点与进一步研究的课题 | 第51-52页 |
| 创新点 | 第51页 |
| 进一步研究的课题 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
