摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
第1章 前言 | 第11-14页 |
第2章 实验材料 | 第14-17页 |
2.1 实验动物 | 第14页 |
2.2 实验仪器 | 第14-15页 |
2.3 实验试剂 | 第15-16页 |
2.4 其他 | 第16-17页 |
第3章 实验方法与步骤 | 第17-32页 |
3.1 实验相关器材的准备与处理 | 第17页 |
3.2 体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及鉴定 | 第17-19页 |
3.2.1 原代细胞的提取、分离及传代 | 第17-18页 |
3.2.2 细胞传代 | 第18页 |
3.2.3 流式细胞术鉴定细胞表型 | 第18-19页 |
3.2.4 测潮霉素最低筛选浓度 | 第19页 |
3.3 bFGF 基因转染大鼠 BMSCs | 第19-29页 |
3.3.1 构建载体质粒 pcDNA3.1 以及重组质粒 bFGF-pcDNA3.1 | 第19-21页 |
3.3.2 重组质粒 bFGF-pcDNA3.1 与空白质粒 pcDNA3.1 的转化与提取 | 第21-23页 |
3.3.3 质粒转染大鼠 BMSCs | 第23-24页 |
3.3.4 施加筛选压力筛选稳定转染株 | 第24-25页 |
3.3.5 检测转染效率 | 第25-29页 |
3.3.6 BMSCs 移植前的收集和 CM-Dil 体外标记 | 第29页 |
3.4. 移植外源性 bFGF 基因转染后的 BMSCs 至造模大鼠体内实验 | 第29-31页 |
3.4.1 动物模型准备 | 第29-30页 |
3.4.2 实验分组 | 第30页 |
3.4.3 观察大鼠的一般情况和采集标本 | 第30-31页 |
3.4.4 大鼠肺组织病理学检测 | 第31页 |
3.5 统计学方法 | 第31-32页 |
第4章 实验结果 | 第32-38页 |
4.1 大鼠 BMSCs 分离培养、鉴定以及测潮霉素筛选最低有效浓度 | 第32-33页 |
4.1.1 大鼠 BMSCs 分离培养及鉴定 | 第32页 |
4.1.2 测潮霉素筛选最低有效浓度 | 第32-33页 |
4.2 质粒的鉴定 | 第33-34页 |
4.2.1 质粒 DNA 纯度和浓度的测定 | 第33页 |
4.2.2 质粒酶切电泳 | 第33页 |
4.2.3 质粒测序鉴定结果 | 第33-34页 |
4.3 pcDNA3.1-bFGF 质粒及空白 pcDNA3.1 质粒转染大鼠 BMSCs 效率检测 | 第34页 |
4.3.1 绿色荧光蛋白(GFP)表达 | 第34页 |
4.3.2 qRT-PCR 检测 bFGF 基因的表达 | 第34页 |
4.3.3 Western-blot 检测 bFGF 蛋白的表达 | 第34页 |
4.4 体内实验情况 | 第34-38页 |
4.4.1 各组大鼠一般情况 | 第34-35页 |
4.4.2 BMSCs 在各组大鼠肺组织的分布与定位 | 第35页 |
4.4.3 各组大鼠给药后血气分析结果 | 第35-36页 |
4.4.4 各组大鼠给药后肺泡灌洗液 WBC 及 N%计数结果 | 第36页 |
4.4.5 各组大鼠给药后肺组织病理学检查 | 第36-38页 |
第5章 讨论 | 第38-43页 |
第6章 结论与展望 | 第43-44页 |
6.1 结论 | 第43页 |
6.2 展望 | 第43-44页 |
致谢 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-48页 |
附图 | 第48-55页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第55-56页 |
综述 | 第56-62页 |
参考文献 | 第61-62页 |