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bFGF基因转染MSCs对COPD的修复作用及其机制研究

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
第1章 前言第11-14页
第2章 实验材料第14-17页
    2.1 实验动物第14页
    2.2 实验仪器第14-15页
    2.3 实验试剂第15-16页
    2.4 其他第16-17页
第3章 实验方法与步骤第17-32页
    3.1 实验相关器材的准备与处理第17页
    3.2 体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及鉴定第17-19页
        3.2.1 原代细胞的提取、分离及传代第17-18页
        3.2.2 细胞传代第18页
        3.2.3 流式细胞术鉴定细胞表型第18-19页
        3.2.4 测潮霉素最低筛选浓度第19页
    3.3 bFGF 基因转染大鼠 BMSCs第19-29页
        3.3.1 构建载体质粒 pcDNA3.1 以及重组质粒 bFGF-pcDNA3.1第19-21页
        3.3.2 重组质粒 bFGF-pcDNA3.1 与空白质粒 pcDNA3.1 的转化与提取第21-23页
        3.3.3 质粒转染大鼠 BMSCs第23-24页
        3.3.4 施加筛选压力筛选稳定转染株第24-25页
        3.3.5 检测转染效率第25-29页
        3.3.6 BMSCs 移植前的收集和 CM-Dil 体外标记第29页
    3.4. 移植外源性 bFGF 基因转染后的 BMSCs 至造模大鼠体内实验第29-31页
        3.4.1 动物模型准备第29-30页
        3.4.2 实验分组第30页
        3.4.3 观察大鼠的一般情况和采集标本第30-31页
        3.4.4 大鼠肺组织病理学检测第31页
    3.5 统计学方法第31-32页
第4章 实验结果第32-38页
    4.1 大鼠 BMSCs 分离培养、鉴定以及测潮霉素筛选最低有效浓度第32-33页
        4.1.1 大鼠 BMSCs 分离培养及鉴定第32页
        4.1.2 测潮霉素筛选最低有效浓度第32-33页
    4.2 质粒的鉴定第33-34页
        4.2.1 质粒 DNA 纯度和浓度的测定第33页
        4.2.2 质粒酶切电泳第33页
        4.2.3 质粒测序鉴定结果第33-34页
    4.3 pcDNA3.1-bFGF 质粒及空白 pcDNA3.1 质粒转染大鼠 BMSCs 效率检测第34页
        4.3.1 绿色荧光蛋白(GFP)表达第34页
        4.3.2 qRT-PCR 检测 bFGF 基因的表达第34页
        4.3.3 Western-blot 检测 bFGF 蛋白的表达第34页
    4.4 体内实验情况第34-38页
        4.4.1 各组大鼠一般情况第34-35页
        4.4.2 BMSCs 在各组大鼠肺组织的分布与定位第35页
        4.4.3 各组大鼠给药后血气分析结果第35-36页
        4.4.4 各组大鼠给药后肺泡灌洗液 WBC 及 N%计数结果第36页
        4.4.5 各组大鼠给药后肺组织病理学检查第36-38页
第5章 讨论第38-43页
第6章 结论与展望第43-44页
    6.1 结论第43页
    6.2 展望第43-44页
致谢第44-45页
参考文献第45-48页
附图第48-55页
攻读学位期间的研究成果第55-56页
综述第56-62页
    参考文献第61-62页

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