| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第9-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 microRNA (miRNA)的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1.1 miRNA的发现与命名 | 第13-14页 |
| 1.1.2 miRNA的生物加工过程 | 第14-17页 |
| 1.1.3 miRNA的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.1.4 miRNA靶基因的识别和鉴定方法 | 第18-20页 |
| 1.1.5 家猪miRNA研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2 miRNA基因遗传变异与表型变异 | 第22-24页 |
| 1.2.1 miRNA基因的保守性及遗传变异 | 第22-23页 |
| 1.2.2 miRNA基因遗传变异与人类疾病及动物表型变异 | 第23-24页 |
| 1.2.3 miRNA基因遗传变异与进化 | 第24页 |
| 1.3 miR-378研究进展 | 第24-27页 |
| 1.3.1 miR-378的发现和命名 | 第24-25页 |
| 1.3.2 miR-378的组织表达分布与功能 | 第25-26页 |
| 1.3.3 猪miR-378的研究现状 | 第26-27页 |
| 1.4 研究内容与目的意义 | 第27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-49页 |
| 2.1 试验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第27-28页 |
| 2.1.2 样品采集 | 第28页 |
| 2.1.3 实验菌株、质粒和细胞系的来源 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要试剂及配制 | 第29-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-49页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.2 基因多态性分析 | 第32-33页 |
| 2.2.3 Pre-miR-378-2二级结构及其自由能预测 | 第33页 |
| 2.2.4 Pri-miRNA表达载体的构建 | 第33-39页 |
| 2.2.5 双荧光素酶报告载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.6 细胞培养 | 第40-41页 |
| 2.2.7 细胞转染 | 第41-43页 |
| 2.2.8 3T3-L1前脂肪细胞分化 | 第43页 |
| 2.2.9 细胞总RNA的抽提 | 第43-44页 |
| 2.2.10 qRT-PCR | 第44-46页 |
| 2.2.11 miR-378W/M靶基因预测 | 第46页 |
| 2.2.12 miR-378W/M靶基因功能富集分析 | 第46-47页 |
| 2.2.13 双荧光素酶报告实验 | 第47-48页 |
| 2.2.14 RNA-pull down试验 | 第48-49页 |
| 2.2.15 油红O染色定量 | 第49页 |
| 2.3 数据处理方法 | 第49页 |
| 2.3.1 qRT-PCR数据处理 | 第49页 |
| 2.3.2 双荧光素酶报告实验数据处理 | 第49页 |
| 3 试验结果与分析 | 第49-71页 |
| 3.1 ssc-miR-378-2序列分析结果 | 第49-52页 |
| 3.1.1 猪基因组DNA提取结果 | 第49-50页 |
| 3.1.2 miR-378-2序列PCR扩增结果 | 第50页 |
| 3.1.3 ssc-miR-378-2基因突变检测结果 | 第50-51页 |
| 3.1.4 miR-378物种间保守性分析结果 | 第51-52页 |
| 3.2 Pre-miR-378-2W/M的二级结构和自由能分析结果 | 第52-53页 |
| 3.2.1 Pre-miR-378-2W/M二级结构的预测结果 | 第52页 |
| 3.2.2 Pre-miR-378-2W/M自由能的预测结果 | 第52-53页 |
| 3.3 miR-378-2突变对其表达量差异分析结果 | 第53-57页 |
| 3.3.1 Pri-miR-378-2W/M过表达载体构建结果 | 第53-55页 |
| 3.3.2 miR-378-2W/M过表达载体的表达量分析结果 | 第55-57页 |
| 3.4 miR-378W/M靶基因预测及功能富集分析结果 | 第57-64页 |
| 3.4.1 miR-378W/M靶基因预测分析结果 | 第57-59页 |
| 3.4.2 miR-378W/M靶基因功能富集分析结果 | 第59-64页 |
| 3.5 靶基因验证 | 第64-68页 |
| 3.5.1 双荧光素酶报告试验验证结果 | 第64-68页 |
| 3.5.2 RNA-pull down试验验证结果 | 第68页 |
| 3.6 miR-378突变对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响 | 第68-71页 |
| 3.6.1 3T3-L1前脂肪细胞的转染效率 | 第68-69页 |
| 3.6.2 油红O检测脂肪细胞中脂质沉积结果 | 第69-70页 |
| 3.6.3 miR-378突变对脂肪细胞分化和分解相关基因表达的影响 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 4.1 miR-378-2序列突变的品种特异性 | 第71-72页 |
| 4.2 miR-378-2序列突变对其二级结构和表达量的影响 | 第72页 |
| 4.3 miR-378种子序列+5A>G突变对靶基因识别和功能富集通路的影响 | 第72-73页 |
| 4.4 miR-378种子序列+5A>G突变对脂肪细胞分化和脂质沉积的影响 | 第73-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第85页 |
