| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第1章 综述 | 第12-18页 |
| 1.1 结核病与人类健康 | 第12页 |
| 1.2 分枝杆菌与TLR2的相互作用 | 第12-13页 |
| 1.3 IL-1β的产生,加工分泌,及其在MTB感染控制中的作用 | 第13-15页 |
| 1.3.1 IL-1β在宿主的天然免疫中的作用及与之相关的疾病 | 第13页 |
| 1.3.2 激活IL-1β表达的病原体相关分子模式 | 第13-14页 |
| 1.3.3 IL-1β的加工和分泌 | 第14-15页 |
| 1.3.4 IL-1β的作用 | 第15页 |
| 1.4 MAPK调控IL-1β的表达 | 第15-17页 |
| 1.4.1 MAPK简介 | 第15-16页 |
| 1.4.2 p38 MAPK | 第16页 |
| 1.4.3 ERK1/2 | 第16页 |
| 1.4.4 PI3K-Akt途径 | 第16-17页 |
| 1.5 PE家族和PE35 | 第17-18页 |
| 第2章 前言 | 第18-19页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第19-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第19-24页 |
| 3.1.1 实验菌株、质粒和细胞 | 第19页 |
| 3.1.2 培养基和主要试剂 | 第19-24页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌PE35基因(Rv3872)PCR引物的设计与合成 | 第24页 |
| 3.2.2 结核分枝杆菌PE35基因(Rv3872)扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.3 PCR扩增产物的柱式胶回收纯化 | 第25页 |
| 3.2.4 Rv3872基因的TA克隆 | 第25-26页 |
| 3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| 3.2.6 质粒的提取 | 第26页 |
| 3.2.7 Rv3872基因亚克隆至pET-28,pEGFP-C1质粒,并转化至大肠杆菌DH5α菌株中 | 第26-27页 |
| 3.2.8 脂质体转染 | 第27-28页 |
| 3.2.9 转染细胞的筛选 | 第28页 |
| 3.2.10 GFP,GFP-PE35融合蛋白在转染RAW264.7细胞中的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2.11 LPS处理 | 第29页 |
| 3.2.12 细胞上清的收集 | 第29页 |
| 3.2.13 RAW264.7细胞培养 | 第29页 |
| 3.2.14 ELISA实验 | 第29-30页 |
| 3.2.15 western blot分析 | 第30-31页 |
| 3.2.16 cDNA合成 | 第31-32页 |
| 3.2.17 实时定量荧光实时定量荧光PCR | 第32页 |
| 3.2.18 Pull down分析试剂 | 第32页 |
| 3.2.19 纯化天然His标签蛋白 | 第32-33页 |
| 3.2.20 数据处理 | 第33-34页 |
| 第4章 结果与分析 | 第34-43页 |
| 4.1 pEGFP-C1-PE35重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| 4.1.1 Rv3872基因的PCR扩增和鉴定 | 第34页 |
| 4.1.2 重组质粒T-PE35的鉴定 | 第34页 |
| 4.1.3 在大肠杆菌DH5α菌株中构建并鉴定重组质粒pEGFP-C1-PE35 | 第34-35页 |
| 4.2 转染的RAW264.7细胞中的pEGFP-C1和重组质粒pEGFP-C1-PE | 第35-37页 |
| 4.2.1 瞬时转染细胞的获得 | 第35页 |
| 4.2.2 获得稳定表达PE35蛋白的RAW264.7细胞系 | 第35-36页 |
| 4.2.3 PE35基因整合进RAW264.7细胞的基因组中 | 第36页 |
| 4.2.4 PE35基因在RAW264.7细胞中成功转录 | 第36-37页 |
| 4.2.5 PE35蛋白在稳定转染的RAW264.7细胞中表达 | 第37页 |
| 4.3 PE35降低LPS诱导的IL-1β产生 | 第37-38页 |
| 4.4 PE35减弱IL-1β表达的能力不依赖于p38 MAPK和ERK1/2途径 | 第38-39页 |
| 4.5 pET-28-Rv3872融合蛋白的表达,纯化和鉴定 | 第39-41页 |
| 4.5.1 Rv3872基因的PCR扩增和鉴定 | 第39-40页 |
| 4.5.2 在大肠杆菌DH5α菌株中构建并鉴定重组质粒pET-28-Rv3872重组质粒 | 第40页 |
| 4.5.3 在大肠杆菌BL21菌株中构建并鉴定重组质粒pET-28-Rv3872 | 第40-41页 |
| 4.5.4 pET-28-Rv3872重组蛋白表达和纯化 | 第41页 |
| 4.6 在RAW264.7中,PE35蛋白能与TLR2结合 | 第41-43页 |
| 第5章 结论与展望 | 第43-46页 |
| 5.1 实验结论与分析 | 第43-44页 |
| 5.2 展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
| 在学期间所发表的文章 | 第52页 |
