| 中文摘要 | 第9-14页 |
| 英文摘要 | 第14-19页 |
| 第1章 前言 | 第21-26页 |
| 1.1 前列腺癌干细胞——进展期前列腺癌“移动的治疗靶点” | 第21-22页 |
| 1.2 关于CSCs形成分子机制研究进展 | 第22-25页 |
| 1.2.2 CSCs的自我更新与修复 | 第24页 |
| 1.2.3 表观遗传修饰与CSCs | 第24-25页 |
| 1.3. CUL4B是一个新颖的癌基因:重要但知之甚少 | 第25-26页 |
| 第2章 材料方法 | 第26-40页 |
| 2.1 材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 细胞株来源 | 第26页 |
| 2.1.2 生化试剂与耗材 | 第26-28页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.4 全基因组表达谱芯片及miRNA-seq数据 | 第28页 |
| 2.1.5 质粒及菌种 | 第28-29页 |
| 2.2 方法: | 第29-31页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 2.2.2. 质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.3 细胞瞬时转染 | 第31页 |
| 2.4 构建前列腺癌PC3、DU145稳筛细胞株 | 第31-32页 |
| 2.4.1 筛选嘌呤霉素最佳作用浓度 | 第31-32页 |
| 2.4.2 构建病毒稳筛细胞株 | 第32页 |
| 2.5 平板克隆实验 | 第32页 |
| 2.5.1 细胞种板 | 第32页 |
| 2.5.2 结晶紫染色 | 第32页 |
| 2.6 干细胞微球形成实验 | 第32-33页 |
| 2.6.1 配置特殊培养液 | 第32-33页 |
| 2.6.2 第一次成球 | 第33页 |
| 2.6.3 第二次成球 | 第33页 |
| 2.7 3D微球实验 | 第33页 |
| 2.8 前列腺癌细胞总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.9 反转录及实时荧光定量PCR | 第34-36页 |
| 2.9.1 反转录 | 第34-35页 |
| 2.9.2 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.9.3 普通RT-PCR | 第36页 |
| 2.10 免疫印迹杂交实验 | 第36-38页 |
| 2.10.1 提取蛋白 | 第37页 |
| 2.10.2 电泳转膜 | 第37页 |
| 2.10.3 封闭、抗体孵育、曝光显影 | 第37-38页 |
| 2.11 染色质免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 2.11.1 甲醛交联与超声破碎 | 第38页 |
| 2.11.2 除杂及抗体孵育 | 第38页 |
| 2.11.3 免疫复合物的沉淀、洗涤和解交联 | 第38-39页 |
| 2.11.4 DNA纯化 | 第39页 |
| 2.11.5 PCR分析 | 第39页 |
| 2.12 双荧光素酶报告基因实验 | 第39-40页 |
| 2.13 统计学分析 | 第40页 |
| 第3章 结果 | 第40-53页 |
| 3.1 CUL4B在CRPC进展中发挥的作用分析 | 第40-46页 |
| 3.1.1 CUL4B在去势抵抗性前列腺癌中表达上调 | 第40-42页 |
| 3.1.2 CUL4B在CRPC细胞中表达上调 | 第42-43页 |
| 3.1.3 CUL4B促进CRPC细胞增殖 | 第43页 |
| 3.1.4 CUL4B的激素反应性研究 | 第43-44页 |
| 3.1.5 CUL4B在CRPC转变过程中表达变化 | 第44页 |
| 3.1.6 CUL4B对AR及其下游基因的调控作用 | 第44-46页 |
| 3.2 CUL4B在前列腺癌干细胞干性调控中的作用研究 | 第46-49页 |
| 3.2.1 CUL4B与前列腺癌干细胞相关 | 第46-47页 |
| 3.2.2 CUL4B对肿瘤细胞成干能力的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.3 CUL4B对前列腺癌肿瘤干细胞相关标志物的影响 | 第48页 |
| 3.2.4 芯片分析CUL4B下游调控基因 | 第48-49页 |
| 3.3 CUL4B通过CUL4B-miR200b/c-BMI1调控轴调控前列腺癌细胞干性 | 第49-53页 |
| 3.3.1 miR200b/c是CUL4B的下游调控miRNA | 第49-50页 |
| 3.3.2 CUL4B直接结合于miR200b/c的启动子区 | 第50-51页 |
| 3.3.3 miR200b/c可直接调控BMI1 | 第51-52页 |
| 3.3.4 miR200b/c参与了CUL4B对BMI1的调控 | 第52-53页 |
| 第4章 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 前列腺癌干细胞的研究进展与临床应用价值: | 第53-54页 |
| 4.2 CUL4B分子在癌症进展中的研究 | 第54-55页 |
| 4.3 CUL4B可能调控PCSCs形成 | 第55-56页 |
| 4.4. 本课题的研究思路和科学意义 | 第56-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附件 | 第65页 |
