| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 病原学特征 | 第12页 |
| 1.2 生活史 | 第12-13页 |
| 1.3 流行病学 | 第13页 |
| 1.4 牛泰勒虫病诊断方法研究 | 第13-16页 |
| 1.4.1 病原体检查 | 第13-14页 |
| 1.4.2 血清学诊断 | 第14-15页 |
| 1.4.2.1 补体结合试验 | 第14页 |
| 1.4.2.2 间接免疫荧光抗体实验 | 第14页 |
| 1.4.2.3 酶联免疫吸附试验 | 第14-15页 |
| 1.4.3 分子生物学诊断 | 第15-16页 |
| 1.5 牛泰勒虫膜蛋白研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5.1 子孢子表面抗原蛋白 | 第16页 |
| 1.5.2 裂殖体表面蛋白 | 第16-17页 |
| 1.5.3 裂殖子/梨浆虫表面抗原蛋白 | 第17页 |
| 1.6 研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 牛泰勒虫MPSP基因克隆表达及反应原性分析 | 第19-32页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 虫体与血清 | 第19-20页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 牛泰勒虫MPSP基因的生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| 2.2.3 MPSP基因的PCR扩增 | 第21页 |
| 2.2.4 pET-30a/MPSP重组表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第22页 |
| 2.2.6 表达产物的纯化 | 第22-24页 |
| 2.2.7 Western-Blot分析 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-29页 |
| 2.3.1 MPSP核酸及蛋白序列生物信息学分析 | 第24-26页 |
| 2.3.2 MPSP基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组蛋白的表达和纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.4 重组蛋白的Western分析 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 以重组蛋白MPSP为抗原的间接ELISA方法的建立 | 第32-44页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 抗原的制备 | 第32-33页 |
| 3.1.4 血清的采集 | 第33页 |
| 3.1.4.1 标准阴阳性血清 | 第33页 |
| 3.1.4.2 阴阳性性血清及其它血清 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 间接ELISA试验程序 | 第33-34页 |
| 3.2.2 间接ELISA最佳反应条件的摸索 | 第34-35页 |
| 3.2.2.1 抗原和抗体最佳稀释倍数的测定 | 第34页 |
| 3.2.2.2 酶结合物最佳稀释倍数的测定 | 第34-35页 |
| 3.2.2.3 封闭液的选择 | 第35页 |
| 3.2.3 ELISA阳性阈值和敏感性、特异性的确定 | 第35页 |
| 3.2.4 特异性实验(交叉实验) | 第35页 |
| 3.2.5 抗体动态曲线的评价 | 第35-36页 |
| 3.2.6 PCR方法检测泰勒虫基因组 | 第36页 |
| 3.2.7 野外样品ELISA方法的评价 | 第36页 |
| 3.3 结果 | 第36-41页 |
| 3.3.1 间接ELISA最佳反应条件的摸索 | 第36-38页 |
| 3.3.1.1 抗原最佳稀倍数的测定 | 第36页 |
| 3.3.1.2 血清最佳稀释度的测定 | 第36-37页 |
| 3.3.1.3 酶结合物最佳工作浓度的测定 | 第37-38页 |
| 3.3.1.4 封闭液的选择 | 第38页 |
| 3.3.2 ELISA阳性阈值和特异性、敏感性的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.3 特异性实验(交叉实验) | 第39页 |
| 3.3.4 抗体动态曲线的评价 | 第39-40页 |
| 3.3.5 PCR方法检测泰勒虫基因组 | 第40-41页 |
| 3.3.6 ELISA方法的评价 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 我国部分地区牛泰勒虫病血清学调查 | 第44-49页 |
| 4.1 材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 抗原的制备 | 第44页 |
| 4.1.4 血清的采集 | 第44-45页 |
| 4.1.4.1 标准阴阳性血清 | 第44-45页 |
| 4.1.4.2 其他血清 | 第45页 |
| 4.2 方法 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
