| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 主要符号表 | 第10-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 | 第11-12页 |
| 1.2 真核表达系统 | 第12-13页 |
| 1.3 蛋白酶分子改造 | 第13-15页 |
| 1.4 分子对接 | 第15-16页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌株及载体 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.3 实验仪器设备 | 第19-21页 |
| 2.1.4 分析软件和网站 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 毕赤酵母表达突变MBSP的菌株构建与重组表达 | 第21-27页 |
| 2.2.2 突变MBSP的酶学性质分析 | 第27-28页 |
| 2.2.3 突变MBSP的结构稳定性分析 | 第28页 |
| 2.2.4 突变MBSP与荧光底物的分子对接分析 | 第28-29页 |
| 2.2.5 突变MBSP的抑制动力学分析 | 第29-30页 |
| 2.2.6 突变MBSP对过敏原蛋白质的酶解分析 | 第30-31页 |
| 第3章 结果与分析 | 第31-57页 |
| 3.1 毕赤酵母表达突变MBSP的菌株构建与重组表达 | 第31-39页 |
| 3.1.1 MBSP的理性设计 | 第31页 |
| 3.1.2 突变MBSP的基因克隆与体外表达 | 第31-37页 |
| 3.1.3 突变MBSP表达产物的分析鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2 突变MBSP的酶学性质分析 | 第39-44页 |
| 3.2.1 酶活力测定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 最适温度和温度稳定性测定 | 第40页 |
| 3.2.3 最适pH和pH稳定性测定 | 第40-41页 |
| 3.2.4 底物特异性测定 | 第41-42页 |
| 3.2.5 动力学参数测定 | 第42-43页 |
| 3.2.6 半衰期参数测定 | 第43-44页 |
| 3.3 突变MBSP的结构稳定性分析 | 第44-47页 |
| 3.3.1 二级结构分析 | 第44-46页 |
| 3.3.2 三级结构分析 | 第46-47页 |
| 3.4 突变MBSP与荧光底物的分子对接分析 | 第47-51页 |
| 3.4.1 酶与底物分子结构文件的准备 | 第47-48页 |
| 3.4.2 酶与底物的分子对接 | 第48-51页 |
| 3.5 突变MBSP的抑制动力学分析 | 第51-54页 |
| 3.5.1 LBTI对MBSP的抑制作用 | 第51-52页 |
| 3.5.2 STI对MBSP的抑制作用 | 第52-54页 |
| 3.6 突变MBSP对过敏原蛋白质的酶解分析 | 第54-57页 |
| 3.6.1 胰蛋白酶与鲫鱼MBSP对原肌球蛋白的酶解分析 | 第54-55页 |
| 3.6.2 胰蛋白酶与鲫鱼MBSP对精氨酸激酶的酶解分析 | 第55-57页 |
| 第4章 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 突变MBSP的重组表达与酶学性质分析 | 第57-58页 |
| 4.2 突变MBSP的结构稳定性分析 | 第58页 |
| 4.3 突变MBSP与荧光底物的分子对接分析 | 第58-59页 |
| 4.4 突变MBSP的抑制动力学分析及对过敏原的酶解分析 | 第59-61页 |
| 第5章 结论与展望 | 第61-62页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 在学期间科研成果情况 | 第74页 |
