| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| 1 什么是复杂性状 | 第8-9页 |
| 2 复杂性状的研究手段 | 第9-11页 |
| 3 QTL作图的原理和方法 | 第11-13页 |
| 4 酿酒酵母——适合数量遗传学基础研究的模式生物 | 第13页 |
| 5 酿酒酵母絮凝性状 | 第13-16页 |
| 5.1 什么是酿酒酵母絮凝性状 | 第13-14页 |
| 5.2 影响絮凝的基因有哪些 | 第14-15页 |
| 5.3 絮凝的遗传学和分子机制 | 第15页 |
| 5.4 影响絮凝的环境因素 | 第15-16页 |
| 5.5 絮凝是适合数量遗传学研究的非连续复杂性状 | 第16页 |
| 6 酵酒酵母侵袭性 | 第16-20页 |
| 6.1 酿酒酵母侵袭性简介 | 第16-17页 |
| 6.2 酿酒酵母侵袭性遗传分子机制研究现状 | 第17-20页 |
| 7 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 酵母分类复杂性状QTL作图 | 第22-41页 |
| 1 试剂和材料 | 第22-24页 |
| 1.1 试剂 | 第22页 |
| 1.2 溶液 | 第22-23页 |
| 1.3 工具软件 | 第23页 |
| 1.4 仪器 | 第23-24页 |
| 1.5 材料 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.1 作图群体的构建 | 第24页 |
| 2.2 作图群体表型测定 | 第24-25页 |
| 2.3 微卫星标记的搜索和基因分型 | 第25页 |
| 2.4 SNP标记的搜索和分型 | 第25-26页 |
| 2.5 酵母DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.6 DNA片断的回收纯化 | 第27页 |
| 2.7 全基因组的QTL扫描 | 第27-28页 |
| 3 结果和分析 | 第28-38页 |
| 3.1 絮凝性状的QTL作图 | 第28-32页 |
| 3.1.1 群体构建与表型测定 | 第28-29页 |
| 3.1.2 标记搜索及基因分型 | 第29-30页 |
| 3.1.3 QTL作图与精细定位 | 第30-32页 |
| 3.2 酵母侵袭性QTL作图 | 第32-38页 |
| 3.2.1 侵袭性表型测定 | 第32-35页 |
| 3.2.2 基因型测定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 QTL作图与精细定位 | 第36-38页 |
| 4. 讨论 | 第38-41页 |
| 4.1 制约QTL定位的重要因素 | 第38-39页 |
| 4.2 分类性状的遗传基础研究 | 第39-41页 |
| 第三章 主效基因的定位与克隆 | 第41-76页 |
| 1 试剂和材料 | 第41-46页 |
| 1.1 试剂 | 第41-42页 |
| 1.2 溶液 | 第42-45页 |
| 1.3 工具软件 | 第45页 |
| 1.4 仪器 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-60页 |
| 2.1 基因敲除 | 第46-52页 |
| 2.1.1 抗生素基因敲除法引物设计 | 第46-48页 |
| 2.1.2 置换片断PCR扩增 | 第48页 |
| 2.1.3 酵母转化 | 第48-49页 |
| 2.1.4 转化子验证 | 第49-51页 |
| 2.1.5 5-FOA基因敲除法 | 第51-52页 |
| 2.2 候选基因的序列分析 | 第52-53页 |
| 2.3 等位基因置换 | 第53-60页 |
| 2.3.1 Zeocin抗性筛选法 | 第53-59页 |
| 2.3.1.1 长片断PCR扩增 | 第53-55页 |
| 2.3.1.2 T载体克隆 | 第55-56页 |
| 2.3.1.3 细菌转化 | 第56-57页 |
| 2.3.1.4 连接反应 | 第57页 |
| 2.3.1.5 基因置换质粒的构建 | 第57页 |
| 2.3.1.6 酵母转化 | 第57-59页 |
| 2.3.2 5-FOA置换法 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-74页 |
| 3.1 酵母絮凝主效基因的定位与克隆 | 第60-69页 |
| 3.1.1 基因敲除FPQ2、FLO1、FLO8、FPQ15 | 第60-62页 |
| 3.1.2 FPQ2、FL08与FPQ15的等位基因置换 | 第62-63页 |
| 3.1.3 序列分析 | 第63-64页 |
| 3.1.4 序列比FPQ2与FPQ15的错义突变 | 第64-67页 |
| 3.1.5 4个QTG的遗传互作 | 第67-69页 |
| 3.2 酵母侵袭性主效QTL的定位与基因克隆 | 第69-74页 |
| 3.2.1 候选基因的敲除 | 第69-70页 |
| 3.2.2 候选基因序列分析 | 第70-71页 |
| 3.2.3 等位基因置换 | 第71-74页 |
| 4 讨论与结论 | 第74-76页 |
| 4.1 QTG的鉴定——迈出解析复杂性状的关键一步 | 第74页 |
| 4.2 FLO1基因的测序——特异性的保证 | 第74-75页 |
| 4.3 置换失败的原因 | 第75-76页 |
| 第四章 基因功能和遗传互作 | 第76-108页 |
| 1 试剂和材料 | 第76-80页 |
| 1.1 试剂 | 第76-77页 |
| 1.2 溶液 | 第77-79页 |
| 1.3 工具软件 | 第79页 |
| 1.4 仪器 | 第79-80页 |
| 2 方法 | 第80-88页 |
| 2.1 双缺失和多缺失株的构建 | 第80-81页 |
| 2.1.1 双缺失株的构建 | 第80页 |
| 2.1.2 YL1Cfpq2△的相反结合型菌株的构建 | 第80页 |
| 2.1.3 基因缺失组合菌株的构建 | 第80-81页 |
| 2.2 基因表达量的检测方法 | 第81-82页 |
| 2.2.1 酵母RNA提取 | 第81页 |
| 2.2.2 逆转录 | 第81页 |
| 2.2.3 定量PCR | 第81-82页 |
| 2.3 蛋白水平检测 | 第82-83页 |
| 2.3.1 酵母蛋白质抽提 | 第82页 |
| 2.3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第82页 |
| 2.3.3 转膜 | 第82-83页 |
| 2.3.4 检测 | 第83页 |
| 2.4 钙离子阻断极端絮凝 | 第83-84页 |
| 2.5 S2与S5 FLO1敲除 | 第84页 |
| 2.6 定点突变和QTN鉴定 | 第84-85页 |
| 2.6.1 定点突变引物设计 | 第84-85页 |
| 2.6.2 基因拼接 | 第85页 |
| 2.7 酵母双杂—营养缺陷型法、β-半乳糖苷酶显色法 | 第85-87页 |
| 2.7.1 所用到的报告菌株 | 第85-86页 |
| 2.7.2 质粒 | 第86页 |
| 2.7.3 将以上按如下组合质粒转入两报告菌株Y187,AH109 | 第86页 |
| 2.7.4 β-半乳糖苷酶活力测定 | 第86-87页 |
| 2.7.5 His报告基因的验证 | 第87页 |
| 2.8 FPQ2缺失后乙醇耐性的检测 | 第87-88页 |
| 3 结果与分析 | 第88-108页 |
| 3.1 酵母絮凝性状的遗传分子机理 | 第88-101页 |
| 3.1.1 双缺失与多缺失株的表型测定 | 第88页 |
| 3.1.2 QTN的鉴定 | 第88-90页 |
| 3.1.3 Fpq2与Tem1酵母双杂实验(补充数据) | 第90-92页 |
| 3.1.4 QTG表达量与蛋白水平的检测 | 第92-97页 |
| 3.1.4.1 检测FPQ2、FLO1、FLO8、FPQ15四个QTG在两亲本中的表达水平 | 第92-93页 |
| 3.1.4.2 子代不同表型个体中FLO基因家族表达量比较 | 第93-94页 |
| 3.1.4.3 FL01定量PCR的特异性 | 第94-97页 |
| 3.1.5 FLO8、FPQ15对FPQ2基因的互作 | 第97-98页 |
| 3.1.6 Ca~(2+)对极端絮凝表型的阻断 | 第98-99页 |
| 3.1.7 F_2子代超亲分离个体的FLO1基因敲除 | 第99-100页 |
| 3.1.8 细胞絮凝对酵母乙醇耐受性的影响 | 第100-101页 |
| 3.2 酿酒酵母侵袭性多基因网络的初步分析 | 第101-108页 |
| 3.2.1 FPQ15与FLO11基因的表达量分析 | 第101-102页 |
| 3.2.2 FLO11启动子测序 | 第102-104页 |
| 3.2.3 通过构建双缺失株探索QTL基因之间的互作与联系 | 第104-107页 |
| 3.2.4 FPQ15点突变鉴定 | 第107-108页 |
| 4 结论 | 第108-113页 |
| 4.1 絮凝性状的三个不同调控途径 | 第108-112页 |
| 4.1.1 超亲分离的产FLO基因家族的基因型组合 | 第108-109页 |
| 4.1.2 FPQ2——一种全新的絮凝机制 | 第109-110页 |
| 4.1.3 FPQ15——出芽方式的改变引起细胞絮凝 | 第110-112页 |
| 4.2 初步构建侵袭性多基因网络 | 第112-113页 |
| 5 讨论 | 第113-115页 |
| 5.1 复杂性状往往是包含多个性状的复合体 | 第113页 |
| 5.2 FPQ2——更重要的絮凝控制基因 | 第113-114页 |
| 5.3 研究展望 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
