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甲醛分解途径关键酶的原核表达与纯化及应用研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
目录第8-11页
插图和附表清单第11-14页
缩略词第14-16页
第一章 前言第16-37页
   ·甲醛污染的现状以及防治措施第16-18页
     ·甲醛的性质以及对人体的危害性第16页
       ·我国室内甲醛污染的现状第16-17页
     ·甲醛污染的防治措施第17-18页
   ·生物体的甲醛分解途径第18-20页
   ·甲醛脱氢酶的简介第20-25页
     ·甲醛脱氢酶的生理作用第20页
     ·甲醛脱氢酶的生化特性和动力学反应机制第20-22页
     ·甲醛脱氢酶的结构特征第22-23页
     ·甲醛脱氢酶的基因研究进展以及表达调控机制第23-25页
     ·甲醛脱氢酶的应用第25页
   ·硫-甲酰谷胱甘肽水解酶的简介第25-30页
     ·硫-甲酰谷胱甘肽水解酶的生理作用第25-26页
     ·硫-甲酰谷胱甘肽水解酶的生化特性第26-28页
     ·硫-甲酰谷胱甘肽水解酶的结构特征第28-29页
     ·硫-甲酰谷胱甘肽水解酶的基因研究进展第29-30页
   ·甲酸脱氢酶的简介第30-35页
     ·甲酸脱氢酶的生理作用第30页
     ·甲酸脱氢酶的生化特性第30-32页
     ·甲酸脱氢酶的结构特征第32-33页
     ·甲酸脱氢酶的基因研究进展和催化反应机制第33-34页
     ·甲酸脱氢酶的应用第34-35页
   ·本研究的主要内容和意义第35-37页
     ·本研究的主要内容第35-36页
     ·本研究的意义第36-37页
第二章 材料与方法第37-53页
   ·材料第37-40页
     ·菌株和质粒第37页
     ·主要试剂第37页
     ·主要仪器第37-38页
     ·主要培养基第38-40页
   ·实验方法第40-53页
     ·引物合成第40-41页
     ·引物稀释第41页
     ·基因组的提取方法第41-42页
     ·质粒的提取方法第42-43页
     ·PCR方法第43-44页
     ·DNA电泳检测以及胶回收第44-45页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化第45-46页
     ·PCR产物的TA克隆第46-47页
     ·目的基因片段与原核载体的连接第47页
     ·目的蛋白重组菌的构建表达与蛋白纯化方法第47-51页
     ·目的蛋白的酶活检测及稳定性分析方法第51-52页
     ·酶蛋白的固定及甲醛吸收效果的测定第52-53页
第三章 实验结果第53-91页
   ·GSH-依赖型甲醛脱氢酶蛋白(ADH)的制备第53-63页
     ·pET32a(+)-Eadh原核表达载体的构建第53-57页
     ·EADH重组蛋白的表达第57-59页
     ·pET32a(+)-Atadh原核表达载体的构建第59-61页
     ·AtADH重组蛋白的表达第61-62页
     ·AtADH重组蛋白抗体制备的效价结果第62-63页
   ·GSH-非依赖型甲醛脱氢酶蛋白(PADH)的制备第63-73页
     ·pET28a(+)-padh原核表达载体的构建第63-68页
     ·PADH重组蛋白的表达第68-70页
     ·PADH重组蛋白的酶活检测及应用性分析第70-73页
   ·S-甲酰谷胱甘肽水解酶蛋白(FGH)的制备第73-79页
     ·pET32a(+)-fgh原核表达载体的构建第73-77页
     ·FGH重组蛋白的表达第77-78页
     ·FGH重组蛋白抗体制备的效价结果第78-79页
   ·甲酸脱氢酶蛋白(FDH)的制备第79-90页
     ·pET28a(+)-fdh原核表达载体的构建第79-83页
     ·FDH重组蛋白的表达第83-87页
     ·FDH重组蛋白抗体制备的效价结果第87页
     ·FDH重组蛋白的酶活检测及应用性分析第87-90页
   ·酶蛋白的固定第90-91页
第四章 讨论第91-98页
   ·大肠杆菌表达系统的选择第91页
   ·宿主菌以及表达载体的选择第91-92页
   ·目的蛋白在宿主菌的表达情况分析第92-93页
   ·目的蛋白的分离纯化第93-94页
   ·目的蛋白的酶活及其稳定性的分析讨论第94-97页
     ·GSH-非依赖型甲醛脱氢酶重组蛋白第94-95页
     ·甲酸脱氢酶重组蛋白第95-97页
   ·固定化酶对甲醛吸收效果的初步探索第97-98页
第五章 总结和展望第98-100页
   ·总结第98页
   ·展望第98-100页
致谢第100-101页
参考文献第101-110页
附录A 攻读硕士期间发表论文及申请专利目录第110页

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