| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 基因表达差异研究进展 | 第15-22页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·基因表达差异的研究方法 | 第15-17页 |
| ·基于PCR基因表达差异的研究技术 | 第17-20页 |
| ·mRNA差异显示技术的应用 | 第20-21页 |
| ·小结 | 第21-22页 |
| 2 重金属污染研究 | 第22-27页 |
| ·重金属污染状况 | 第22页 |
| ·镉的毒性及其机理 | 第22-23页 |
| ·重金属对甲壳动物的影响 | 第23-25页 |
| ·荧光定量PCR在胁迫诱导基因表达中的应用 | 第25-26页 |
| ·研究展望 | 第26-27页 |
| 3 本论文研究的目的意义和研究方案 | 第27-29页 |
| ·目的意义 | 第27页 |
| ·研究方案 | 第27-29页 |
| 第二章 长江华溪蟹组织器官RNA的提取 | 第29-36页 |
| 1 材料和方法 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·长江华溪蟹组织RNA提取方法 | 第30页 |
| ·除去总RNA中微量的DNA | 第30-31页 |
| ·RNA检测方法 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-34页 |
| ·紫外光分光光度仪检测长江华溪蟹RNA的质量 | 第31页 |
| ·长江华溪蟹RNA琼脂糖凝胶电泳 | 第31-33页 |
| ·长江华溪蟹RNA电泳图的Genetools分析 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 重金属诱导长江华溪蟹主要组织RNA的差异显示 | 第36-49页 |
| 1 材料和方法 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·重金属积累样品的制备 | 第37-38页 |
| ·长江华溪蟹组织RNA提取 | 第38页 |
| ·组织RNA样品cDNA合成 | 第38-39页 |
| ·重金属诱导长江华溪蟹的DD-PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·PCR产物凝胶电泳 | 第40页 |
| ·PAGE凝胶银染法显色 | 第40页 |
| ·差异片段的切取与再扩增 | 第40-41页 |
| ·差异cDNA片段的克隆测序 | 第41页 |
| 2 结果与讨论 | 第41-49页 |
| ·长江华溪蟹体内重金属的积累 | 第41-43页 |
| ·重金属诱导长江华溪DD-PCR扩增 | 第43-46页 |
| ·重金属诱导长江华溪蟹S23引物扩增的差异条带序列分析及同源性比较 | 第46-49页 |
| 第四章 长江华溪蟹β-actin基因cDNA扩增及分子系统发育的初步分析 | 第49-58页 |
| 1 材料和方法 | 第50-51页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·组织RNA提取 | 第50页 |
| ·cDNA合成 | 第50页 |
| ·β-actin基因扩增及测序 | 第50-51页 |
| ·数据分析 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-54页 |
| ·凝胶电泳检测长江华溪蟹PCR产物 | 第51页 |
| ·长江华溪蟹β-actin基因部分序列及七种蟹的同源序列分析 | 第51-53页 |
| ·基于β-actin基因部分序列的分子系统发育树 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-58页 |
| 第五章 重金属诱导长江华溪蟹金属硫蛋白基因表达的定量分析 | 第58-85页 |
| 第一部分 镉诱导长江华溪蟹金属硫蛋白cDNA的表达 | 第58-73页 |
| 1 前言 | 第58-60页 |
| 2 材料和方法 | 第60-62页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·长江华溪蟹组织消化 | 第60-61页 |
| ·长江华溪蟹组织RNA提取与反转录PCR | 第61页 |
| ·长江华溪蟹MT基因实时荧光定量PCR | 第61-62页 |
| ·数据统计分析 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-68页 |
| ·镉在长江华溪蟹主要组织中的积累 | 第62-63页 |
| ·长江华溪蟹β-actin和MT基因RT-PCR | 第63-64页 |
| ·镉诱导长江华溪蟹MT基因在心脏中表达 | 第64-66页 |
| ·镉诱导长江华溪蟹MT基因在鳃中表达 | 第66-67页 |
| ·镉诱导长江华溪蟹MT基因在肝胰腺中表达 | 第67-68页 |
| ·统计相关分析 | 第68页 |
| 4 讨论 | 第68-73页 |
| 第二部分 镉与铜联合诱导长江华溪蟹MT基因的定量分析 | 第73-85页 |
| 1 前言 | 第74-75页 |
| 2 材料和方法 | 第75-78页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·长江华溪蟹组织RNA提取与纯化 | 第76页 |
| ·长江华溪蟹组织样品的一链cDNA合成 | 第76-77页 |
| ·长江华溪蟹组织样品的实时荧光定量PCR | 第77-78页 |
| ·数据统计分析 | 第78页 |
| 3 结果 | 第78-81页 |
| ·长江华溪蟹β-actin基因序列测定 | 第78-79页 |
| ·镉铜诱导长江华溪蟹心脏组织中MT基因实时荧光定量结果 | 第79-80页 |
| ·镉铜诱导长江华溪蟹鳃组织中MT基因实时荧光定量结果 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-85页 |
| 全文结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 个人简况及联系方式 | 第98-100页 |
