| 摘要 | 第3-10页 |
| ABSTRACT | 第10-17页 |
| 缩略词 | 第18-26页 |
| 第一章 前言 | 第26-47页 |
| 第一节 环境内分泌干扰物与Vnz | 第26-27页 |
| 第二节 EDCs与表观遗传跨代继承表型 | 第27-29页 |
| 第三节 Vnz的生殖毒性研究及表观遗传跨代继承研究现状 | 第29-34页 |
| 一、Vnz的流行病学调查及三致试验研究 | 第30-31页 |
| 二、Vnz的抗雄激素样作用研究 | 第31-32页 |
| 三、Vnz生殖遗传毒性研究 | 第32-33页 |
| 四、Vnz表观遗传跨代继承研究现状 | 第33-34页 |
| 第四节 Nedd4与凋亡研究现状 | 第34-40页 |
| 一、Nedd4的生物学功能 | 第34-35页 |
| 二、Nedd4通过对IGF-1R调节机体生长发育和细胞凋亡 | 第35-38页 |
| 三、Nedd4与雄激素受体AR | 第38-39页 |
| 四、Nedd4通过多途径调控肿瘤细胞的凋亡 | 第39-40页 |
| 第五节 IGF-1R信号通路介导的生殖细胞凋亡 | 第40-42页 |
| 一、IGF-1调控颗粒细胞类固醇分泌及卵泡发育 | 第40-41页 |
| 二、IGF-I对睾丸间质细胞类固醇分泌的调控 | 第41页 |
| 三、IGF-Ⅰ抑制细胞凋亡的信号转导途径 | 第41-42页 |
| 第六节 Bcl-2、Caspase3、Caspase9与生殖细胞凋亡 | 第42-45页 |
| 一、Bcl-2与生殖细胞凋亡 | 第43-44页 |
| 二、Caspase3、9与生殖细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 第七节 本研究的目的和意义 | 第45-47页 |
| 第二章 Nedd4介导的Vnz致生殖损伤跨代遗传体内研究 | 第47-93页 |
| 第一节 实验材料与实验仪器 | 第47-49页 |
| 一、实验动物和饲养 | 第47-48页 |
| 二、主要实验试剂 | 第48-49页 |
| 三、实验仪器和设备 | 第49页 |
| 第二节 、实验内容与实验方法 | 第49-57页 |
| 一、实验研究技术路线 | 第50页 |
| 二、动物模型建立 | 第50-51页 |
| 三、研究内容和实验方法 | 第51-57页 |
| 第三节 实验结果 | 第57-80页 |
| 一、用药期间孕鼠体重增长量的变化 | 第57-59页 |
| 二、Vnz对产子数、存活率、雌雄比例、出生体重的影响 | 第59-60页 |
| 三、子鼠睾丸、卵巢、肝、肾脏器系数计算 | 第60-64页 |
| 四、Vnz对P60成年雄性子代精子数量及形态的影响(图见附录二) | 第64-65页 |
| 五、Vnz对P60成年子代血清性激素水平的影响 | 第65-66页 |
| 六、Vnz对P60成年子代血清FSH、LH水平的影响 | 第66-67页 |
| 七、.Vnz对F1子代P20、P60肝、肾、睾丸和卵巢组织HE病理切片观察(图片见附录三) | 第67-68页 |
| 八、Tunel法检测Vnz对P20、P60子代生殖细胞凋亡的影响(图片见附录四) | 第68-69页 |
| 九、免疫组化检测Vnz对母鼠及子代生殖细胞Bcl-2、Caspases3、Caspases9蛋白表达的影响(图见附录五) | 第69-73页 |
| 十、Real-Time-PCR检测子代卵巢、睾丸组织中Nedd4、Grb10、IGF-1R、Bcl-2、caspases3、caspases9表达 | 第73-80页 |
| 第四节、讨论 | 第80-92页 |
| 一、Vnz对孕鼠体重的影响 | 第80-81页 |
| 二、孕期暴露Vnz对产仔数,出生存活率、雌雄比例,出生体重的影响 | 第81页 |
| 三、Vnz对F1成年子代精子数量及形态的影响 | 第81-83页 |
| 四、Vnz对孕鼠血清性激素水平、血清促性腺激素水平的影响 | 第83-84页 |
| 五、Vnz致子代损伤的病理形态学观察 | 第84-86页 |
| 六、Vnz对成年子代生殖细胞凋亡的影响 | 第86-87页 |
| 七、免疫组化检测F1子代生殖细胞凋亡相关因子 | 第87-89页 |
| 八、Nedd4/Grb10复合体调节IGF-IR内在化、泛素化降解机制研究 | 第89-92页 |
| 第五节 小结 | 第92-93页 |
| 第三章 Vnz对颗粒细胞雌二醇分泌及对IGF-1R的影响研究 | 第93-118页 |
| 第一节、实验材料与实验仪器 | 第93-96页 |
| 一、实验动物 | 第93-94页 |
| 二、实验试剂 | 第94页 |
| 三、实验仪器 | 第94-95页 |
| 四、主要试剂的配制 | 第95-96页 |
| 第二节 实验方法 | 第96-100页 |
| 一、卵巢颗粒细胞的获得及培养 | 第96-97页 |
| 二、台盼兰排斥实验检测细胞活力 | 第97页 |
| 三、CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制颗粒细胞生长曲线 | 第97页 |
| 四、Vnz对颗粒细胞生长的影响 | 第97-98页 |
| 五、Vnz对颗粒细胞分化的影响 | 第98页 |
| 六 Vnz对颗粒细胞激素分泌的影响 | 第98-99页 |
| 七、Vnz对卵巢颗粒细胞雌二醇分泌作用机制研究 | 第99页 |
| 八、Vnz对颗粒细胞IGF-1R的影响 | 第99-100页 |
| 九、数据统计分析 | 第100页 |
| 第三节 实验结果 | 第100-110页 |
| 一、细胞活力检测 | 第100页 |
| 二、卵巢颗粒细胞生长曲线 | 第100-102页 |
| 三 Vnz对颗粒细胞生长的影响 | 第102-103页 |
| 四、Vnz对颗粒细胞分化的影响 | 第103-104页 |
| 五、Vnz对细胞激素分泌的影响 | 第104-107页 |
| 六、Vnz对颗粒细胞雌二醇分泌作用机制的研究 | 第107-109页 |
| 七、Vnz对颗粒细胞IGF-1R的影响 | 第109-110页 |
| 第四节 讨论 | 第110-117页 |
| 一、台盼蓝排斥试验检验颗粒细胞活力 | 第110-111页 |
| 二、颗粒细胞生长曲线及Vnz对颗粒细胞生长增殖的影响 | 第111-112页 |
| 三、Vnz对大鼠颗粒细胞雌二醇分泌的影响 | 第112-113页 |
| 四、Vnz对颗粒细胞分化的影响 | 第113-114页 |
| 五、Vnz对卵巢颗粒细胞分泌功能的作用机制 | 第114-115页 |
| 六、Vnz对颗粒细胞IGF-1R的影响 | 第115-117页 |
| 第五节 小结 | 第117-118页 |
| 第四章 Vnz对间质细胞睾酮分泌及对IGF-1R的影响研究 | 第118-134页 |
| 第一节 实验材料与仪器 | 第118-119页 |
| 一、实验动物 | 第118页 |
| 二、实验试剂 | 第118-119页 |
| 三、实验仪器同颗粒细胞培养部分 | 第119页 |
| 四、主要试剂的配制同颗粒细胞培养部分 | 第119页 |
| 第二节 实验内容与实验方法 | 第119-122页 |
| 一、大鼠睾丸间质细胞的原代培养 | 第119-120页 |
| 二、台盼兰排斥实验检测睾丸间质细胞活力 | 第120页 |
| 三、CCK-8试剂盒检测睾丸间质细胞增殖,绘制生长曲线 | 第120页 |
| 四、Vnz对睾丸间质细胞生长增殖的影响 | 第120-121页 |
| 五、Vnz对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 | 第121页 |
| 六、Vnz影响睾丸间质细胞睾酮分泌cAMP可能机制研究 | 第121-122页 |
| 七、Vnz对间质细胞IGF-1R的影响 | 第122页 |
| 八、数据统计分析 | 第122页 |
| 第三节 实验结果 | 第122-129页 |
| 一、台盼兰排斥实验确定大鼠睾丸间质细胞活力 | 第122-123页 |
| 二、CCK8CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制生长曲线 | 第123-124页 |
| 三、Vnz对睾丸间质细胞生长增殖的影响 | 第124-126页 |
| 四、Vnz对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 | 第126-127页 |
| 五、Vnz对睾丸间质细胞cAMP的影响 | 第127-128页 |
| 六、Vnz对睾丸间质细胞IGF-1R的影响 | 第128-129页 |
| 第四节、讨论 | 第129-133页 |
| 一、间质细胞生长曲线及Vnz对间质细胞生长增殖的影响 | 第129-130页 |
| 二、Vnz对间质细胞睾酮分泌的影响 | 第130-131页 |
| 三、Vnz对间质细胞睾酮分泌机制研究 | 第131-133页 |
| 第五节 小结 | 第133-134页 |
| 第五章 结论、创新、展望 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-152页 |
| 附录一 Vnz相关的候选基因和信号通路 | 第152-156页 |
| 附录二 Vnz对P60成年子代精子数量及形态的影响 | 第156-157页 |
| 附录三 Vnz影响P20、P60子代各组织HE切片观察 | 第157-161页 |
| 附录四 Tunel法检测Vnz对P20、P60生殖细胞凋亡的影响 | 第161-163页 |
| 附录五 免疫组化检测Bcl-2、Casepase3和Casepase9因子 | 第163-169页 |
| 附录六、生殖细胞培养 | 第169-170页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第170-171页 |
| 致谢 | 第171页 |
