| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 结核病 | 第15-20页 |
| 1.1.1 结核病的疫情及现状 | 第15-16页 |
| 1.1.2 结核病发病机制 | 第16-17页 |
| 1.1.3 结核病疫苗 | 第17-18页 |
| 1.1.4 结核病的治疗 | 第18-20页 |
| 1.2 结核分枝杆菌 | 第20-21页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌基本形态 | 第20页 |
| 1.2.2 结核分枝杆菌的抵抗力 | 第20-21页 |
| 1.2.3 结核分枝杆菌的致病性 | 第21页 |
| 1.3 结核分枝杆菌与巨噬细胞的相互作用 | 第21-25页 |
| 1.3.1 巨噬细胞对结核分枝杆菌的杀灭 | 第21-23页 |
| 1.3.1.1 吞噬体与溶酶体融合 | 第21-22页 |
| 1.3.1.2 细胞因子和自由基对Mtb的杀伤 | 第22页 |
| 1.3.1.3 巨噬细胞的凋亡 | 第22-23页 |
| 1.3.1.4 结核分枝杆菌抗原的呈递 | 第23页 |
| 1.3.2 Mtb逃避巨噬细胞免疫 | 第23-25页 |
| 1.3.2.1 抑制吞噬体与溶酶体融合 | 第23页 |
| 1.3.2.2 抵抗ROI和RNI的杀伤 | 第23-24页 |
| 1.3.2.3 抑制巨噬细胞的凋亡 | 第24页 |
| 1.3.2.4 阻断特殊受体、改变代谢途径以及调节细胞信号传递 | 第24-25页 |
| 1.4 结核分枝杆菌蛋白质组芯片 | 第25-26页 |
| 1.4.1 结核分枝杆菌蛋白质组学 | 第25页 |
| 1.4.2 结核分枝杆菌蛋白质组芯片 | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-44页 |
| 2.1 实验材料和仪器设备 | 第27-32页 |
| 2.1.1 细胞 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第29页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第29-32页 |
| 2.1.5.1 细胞培养溶液 | 第29-30页 |
| 2.1.5.2 细菌培养基 | 第30页 |
| 2.1.5.3 ELISA相关溶液 | 第30页 |
| 2.1.5.4 SDS-PAGE相关溶液 | 第30-31页 |
| 2.1.5.5 Western Blot相关溶液 | 第31页 |
| 2.1.5.6 其它试剂 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-44页 |
| 2.2.1 THP-1细胞培养 | 第32页 |
| 2.2.2 巨噬细胞吞噬率的测定 | 第32页 |
| 2.2.3 巨噬细胞相关细胞因子在蛋白表达水平的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.4 结核分枝杆菌侵染巨噬细胞实验 | 第33-34页 |
| 2.2.5 巨噬细胞总RNA提取 | 第34页 |
| 2.2.6 巨噬细胞总蛋白提取 | 第34-35页 |
| 2.2.7 巨噬细胞凋亡相关因子在转录表达水平的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.8 蛋白浓度测定 | 第36-37页 |
| 2.2.9 生物素标记蛋白 | 第37页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE和Western Blot | 第37-38页 |
| 2.2.11 巨噬细胞总蛋白与结核分枝杆菌蛋白质组芯片相互作用 | 第38-39页 |
| 2.2.12 结核分枝杆菌蛋白质组芯片数据分析及筛选 | 第39页 |
| 2.2.12.1 结核分枝杆菌蛋白质组芯片数据分析 | 第39页 |
| 2.2.12.2 结核分枝杆菌蛋白质组芯片数据筛选 | 第39页 |
| 2.2.13 结核分枝杆菌基因的克隆 | 第39-42页 |
| 2.2.13.1 目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.13.2 载体质粒的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.13.3 重组质粒的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.13.4 大肠杆菌的转化 | 第42页 |
| 2.2.13.5 阳性克隆子的鉴定 | 第42页 |
| 2.2.14 重组质粒核转染THP-1细胞 | 第42-44页 |
| 第3章 结果与分析 | 第44-56页 |
| 3.1 诱导THP-1分化的PMA浓度评估 | 第44-47页 |
| 3.2 侵染实验侵染比评估 | 第47-48页 |
| 3.3 巨噬细胞总蛋白与结核分枝杆菌蛋白质组芯片相互作用 | 第48-52页 |
| 3.3.1 生物素标记巨噬细胞总蛋白的Western Blot鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.2 THP-1细胞全蛋白与结核分枝杆菌全蛋白质组芯片杂交结果 | 第50-52页 |
| 3.4 相互作用差异的Mtb蛋白的分析及筛选 | 第52-54页 |
| 3.4.1 相互作用差异的Mtb蛋白分析 | 第52页 |
| 3.4.2 相互作用差异的Mtb蛋白筛选 | 第52-54页 |
| 3.4.2.1 相互作用差异的Mtb蛋白的GO功能和KEGG通路富集分析 | 第52-54页 |
| 3.4.2.2 相互作用差异的Mtb蛋白的功能分析 | 第54页 |
| 3.5 结核分枝杆菌蛋白功能研究 | 第54-55页 |
| 3.6 巨噬细胞差异表达蛋白的Western Blot鉴定 | 第55-56页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第56-58页 |
| 4.1 讨论 | 第56-57页 |
| 4.2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
