| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第16-34页 |
| 1.1 牛副流感病毒3型 | 第16-21页 |
| 1.1.1 病毒基因组结构及其编码蛋白 | 第16-17页 |
| 1.1.2 BPIV3的临床症状 | 第17-18页 |
| 1.1.3 BPIV3的诊断方法 | 第18-19页 |
| 1.1.4 BPIV3的感染机理 | 第19-21页 |
| 1.2 蛋白质组学 | 第21-27页 |
| 1.2.1 蛋白质组学概述 | 第21页 |
| 1.2.2 蛋白质组学研究技术 | 第21-24页 |
| 1.2.3 蛋白质组学在病毒学研究中的应用 | 第24-27页 |
| 1.3 p38 MAPK信号通路与病毒感染 | 第27-30页 |
| 1.3.1 p38 MAPK信号通路概述 | 第27-28页 |
| 1.3.2 p38 MAPK信号通路在病毒感染中的作用 | 第28页 |
| 1.3.3 p38 MAPK信号通路在呼吸道病毒感染中的作用 | 第28-30页 |
| 1.4 胆固醇分子与病毒感染 | 第30-31页 |
| 1.4.1 脂类与病毒感染 | 第30页 |
| 1.4.2 胆固醇分子与病毒感染 | 第30-31页 |
| 1.5 项目研究的目的和意义 | 第31-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 细胞和病毒 | 第34页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.2.1 牛副流感病毒3型的增殖及纯化 | 第35页 |
| 2.2.2 BPIV3病毒蛋白单克隆抗体的制备 | 第35-37页 |
| 2.2.3 DAS-ELISA方法的建立 | 第37-38页 |
| 2.2.4 蛋白质组学分析样品的提取和鉴定 | 第38页 |
| 2.2.5 蛋白酶解和iTRAQ标记 | 第38-39页 |
| 2.2.6 SCX分级 | 第39页 |
| 2.2.7 质谱分析 | 第39页 |
| 2.2.8 蛋白质组学数据分析 | 第39-40页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第40页 |
| 2.2.10 RNA提取及实时荧光定量PCR | 第40-41页 |
| 2.2.11 病毒滴度的测定（TCID_(50)） | 第41-42页 |
| 2.2.12 MTT法测定药物对细胞的毒性 | 第42页 |
| 2.2.13 Western-blot | 第42页 |
| 2.2.14 ELISA测定细胞因子含量 | 第42页 |
| 2.2.15 间接免疫荧光 | 第42页 |
| 2.2.16 流式细胞计数 | 第42-43页 |
| 2.3 数据处理 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-78页 |
| 3.1 抗BPIV3病毒蛋白单克隆抗体的制备 | 第44-48页 |
| 3.1.1 单克隆抗体的制备及初步验证 | 第44-46页 |
| 3.1.2 单克隆抗体的纯化及特性分析 | 第46-48页 |
| 3.2 BPIV3双抗体夹心ELISA方法的建立及应用 | 第48-51页 |
| 3.2.1 DAS-ELISA方法的建立 | 第48页 |
| 3.2.2 Cut-off值的确定 | 第48-49页 |
| 3.2.3 特异性试验 | 第49页 |
| 3.2.4 重复性试验 | 第49页 |
| 3.2.5 灵敏性试验 | 第49-50页 |
| 3.2.6 符合率试验 | 第50-51页 |
| 3.3 BPIV3感染MDBK细胞的差异蛋白质组学 | 第51-68页 |
| 3.3.1 BPIV3在MDBK中的活性检测 | 第51-52页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE电泳结果 | 第52-53页 |
| 3.3.3 酶解肽段浓度测定 | 第53页 |
| 3.3.4 SCX分级 | 第53-54页 |
| 3.3.5 定量比值直方分布分析 | 第54页 |
| 3.3.6 相关性分析 | 第54-55页 |
| 3.3.7 蛋白质的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.8 蛋白质定量信息和差异蛋白筛选 | 第56-57页 |
| 3.3.9 重复性分析 | 第57页 |
| 3.3.10 生物信息学分析 | 第57-67页 |
| 3.3.11 差异蛋白qRT-PCR结果 | 第67-68页 |
| 3.4 p38 MAPK信号通路在BPIV3感染中的作用 | 第68-72页 |
| 3.4.1 p38 MAPK通路抑制剂SB202190对MDBK细胞活性的影响 | 第68-69页 |
| 3.4.2 BPIV3感染能够激活p38 MAPK通路 | 第69-70页 |
| 3.4.3 抑制p38 MAPK的激活能够抑制BPIV3的复制 | 第70-71页 |
| 3.4.4 p38 MAPK通路参与BPIV3诱导的炎症反应 | 第71-72页 |
| 3.5 胆固醇分子在BPIV3感染MDBK细胞中的作用 | 第72-78页 |
| 3.5.1 MβCD对MDBK细胞膜胆固醇的作用 | 第73-74页 |
| 3.5.2 去除细胞膜胆固醇抑制病毒复制 | 第74-75页 |
| 3.5.3 细胞膜胆固醇的破坏不影响BPIV3结合靶细胞 | 第75-76页 |
| 3.5.4 病毒进入靶细胞后去除细胞膜胆固醇不影响BPIV3感染 | 第76-77页 |
| 3.5.5 去除BPIV3病毒囊膜胆固醇抑制BPIV3感染 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-92页 |
| 4.1 BPIV3双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第78-79页 |
| 4.2 BPIV3感染MDBK细胞差异蛋白质组学 | 第79-85页 |
| 4.2.1 GO富集分析 | 第79-80页 |
| 4.2.2 KEGG通路分析 | 第80-81页 |
| 4.2.3 差异表达蛋白的分析 | 第81-85页 |
| 4.3 p38 MAPK通路在BPIV3感染中的作用 | 第85-88页 |
| 4.3.1 BPIV3感染能够激活p38 MAPK通路 | 第86页 |
| 4.3.2 p38 MAPK通路在BPIV3复制中的作用 | 第86-87页 |
| 4.3.3 p38 MAPK通路参与BPIV3诱导的炎症反应 | 第87-88页 |
| 4.4 胆固醇分子在BPIV3感染中的作用 | 第88-92页 |
| 4.4.1 去除细胞膜胆固醇对BPIV3感染的影响 | 第88-90页 |
| 4.4.2 去除病毒囊膜胆固醇对BPIV3感染性的影响 | 第90-92页 |
| 5 结论 | 第92-94页 |
| 6 创新与展望 | 第94-96页 |
| 6.1 创新点 | 第94页 |
| 6.2 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 附录 | 第112-124页 |
| 附录1 BPIV3感染MDBK细胞差异表达的蛋白 | 第112-119页 |
| 附录2 与BPIV3感染相关显著富集的信号通路 | 第119-124页 |
| 个人简介 | 第124页 |
