| 摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-30页 |
| 1 植物miRNA概述 | 第10-13页 |
| 1.1 植物miRNA的发现 | 第10页 |
| 1.2 植物miRNA的特点 | 第10-11页 |
| 1.3 植物miRNA的生物合成 | 第11-12页 |
| 1.4 植物miRNA的作用机制 | 第12-13页 |
| 2 植物miRNA与非生物逆境胁迫 | 第13-17页 |
| 2.1 植物miRNA与低氮胁迫 | 第13-14页 |
| 2.2 植物miRNA与低磷胁迫 | 第14页 |
| 2.3 植物miRNA与低硫胁迫 | 第14-15页 |
| 2.4 植物miRNA与微量元素胁迫 | 第15页 |
| 2.5 植物miRNA与干旱胁迫 | 第15页 |
| 2.6 植物miRNA与盐胁迫 | 第15-16页 |
| 2.7 植物miRNA与低温胁迫 | 第16页 |
| 2.8 植物miRNA与其它非生物胁迫 | 第16-17页 |
| 3 植物miRNA的研究方法 | 第17-22页 |
| 3.1 植物miRNA的鉴定 | 第17-18页 |
| 3.1.1 遗传学筛选 | 第17页 |
| 3.1.2 生物信息学分析 | 第17页 |
| 3.1.3 直接克隆 | 第17-18页 |
| 3.1.4 高通量测序 | 第18页 |
| 3.2 植物miRNA的表达检测 | 第18-20页 |
| 3.2.1 Northern杂交 | 第18-19页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 3.3 植物miRNA靶基因的预测及验证 | 第20-22页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-30页 |
| 第二章 高粱幼苗在低磷胁迫下的形态和生理反应 | 第30-42页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| 1.1 供试材料 | 第30页 |
| 1.2 试验方法 | 第30页 |
| 1.3 指标测定 | 第30-32页 |
| 1.3.1 形态指标测定 | 第30-31页 |
| 1.3.2 生理指标测定 | 第31-32页 |
| 1.4 数据处理 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-39页 |
| 2.1 低磷胁迫对高粱幼苗形态指标的影响 | 第32-33页 |
| 2.2 不同基因型高粱耐低磷鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3 不同基因型高粱耐低磷聚类分析 | 第35页 |
| 2.4 低磷胁迫对高粱幼苗生理指标的影响 | 第35-39页 |
| 2.4.1 低磷胁迫对高粱幼苗叶绿素和可溶性蛋白含量的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.2 低磷胁迫对高粱幼苗POD和SOD活性的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.3 低磷胁迫对高粱幼苗丙二醛(MDA)的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.4 低磷胁迫下高粱幼苗各生理指标平均变化率分析 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 3.1 高粱幼苗低磷胁迫的筛选浓度 | 第39页 |
| 3.2 高粱幼苗耐低磷筛选指标 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-42页 |
| 第三章 低氮胁迫对高粱幼苗形态及生理的影响 | 第42-51页 |
| 1 材料与方法 | 第42页 |
| 1.1 供试材料 | 第42页 |
| 1.2 试验方法 | 第42页 |
| 1.3 指标测定及数据处理 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-48页 |
| 2.1 不同氮浓度对高粱幼苗株高和生长速度的影响 | 第42-43页 |
| 2.2 不同氮浓度对高粱幼苗主根长和茎粗的影响 | 第43-44页 |
| 2.3 不同氮浓度对高粱幼苗成活叶数的影响 | 第44-45页 |
| 2.4 不同氮浓度对高粱幼苗地上和地下干重的影响 | 第45页 |
| 2.5 不同氮浓度对高粱幼苗总干重和根冠比的影响 | 第45-46页 |
| 2.6 低氮胁迫对高粱幼苗叶绿素和可溶性蛋白含量的影响 | 第46-47页 |
| 2.7 低氮胁迫对高粱幼苗SOD和POD活性的影响 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 3.1 高粱幼苗低氮胁迫的筛选浓度 | 第48页 |
| 3.2 高粱幼苗低氮胁迫的筛选方法 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第四章 高粱幼苗低氮响应的miRNA及其靶基因预测 | 第51-75页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 1.1 材料处理 | 第51页 |
| 1.2 总RNA提取及纯化 | 第51-52页 |
| 1.3 Solexa深度测序 | 第52-53页 |
| 1.3.1 Solexa深度测序的实验流程 | 第52页 |
| 1.3.2 Solexa深度测序的信息分析流程 | 第52-53页 |
| 1.3.3 新miRNAs的鉴定 | 第53页 |
| 1.3.4 miRNAs靶基因预测 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-70页 |
| 2.1 总RNA提取结果 | 第53-54页 |
| 2.2 小RNA序列信息分析 | 第54-56页 |
| 2.3 高粱已知miRNA分析 | 第56-68页 |
| 2.3.1 已知miRNA的基本情况 | 第56-57页 |
| 2.3.2 已知miRNA的差异表达 | 第57-58页 |
| 2.3.3 差异表达miRNA的特异性 | 第58-59页 |
| 2.3.4 已知miRNA的靶基因预测 | 第59-68页 |
| 2.4 高粱新预测的miRNA分析 | 第68-70页 |
| 2.4.1 新miRNA的预测 | 第68页 |
| 2.4.2 新miRNA的差异表达 | 第68-69页 |
| 2.4.3 新miRNA的靶基因预测 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-74页 |
| 3.1 植物miRNA鉴定方法比较 | 第70页 |
| 3.2 低氮胁迫下高粱小分子RNA的特点 | 第70-71页 |
| 3.3 高粱低氮胁迫下差异miRNA的表达特点 | 第71-72页 |
| 3.4 高粱低氮胁迫下差异miRNA的靶基因特点 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-75页 |
| 第五章 高粱低氮胁迫候选miRNA及其靶基因的验证 | 第75-93页 |
| 1 材料与方法 | 第75-79页 |
| 1.1 试验材料 | 第75页 |
| 1.2 试验方法 | 第75-79页 |
| 1.2.1 高粱幼苗培养及取样 | 第75页 |
| 1.2.2 总RNA提取及反转录 | 第75页 |
| 1.2.3 小RNA的提取 | 第75-76页 |
| 1.2.4 小RNA的Poly(A)加尾反应及反转录 | 第76页 |
| 1.2.5 miRNA荧光定量PCR引物设计 | 第76-77页 |
| 1.2.6 miRNA荧光定量PCR | 第77页 |
| 1.2.7 miRNA靶基因荧光定量PCR引物设计 | 第77-78页 |
| 1.2.8 内参基因的引物设计 | 第78-79页 |
| 1.2.9 miRNA靶基因及内参基因荧光定量PCR | 第79页 |
| 1.2.10 内参基因表达稳定性分析 | 第79页 |
| 1.2.11 定量PCR数据分析方法 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-88页 |
| 2.1 候选miRNA在高粱根系中的定量表达 | 第79-81页 |
| 2.1.1 高粱根系中候选miRNA定量PCR引物特异性 | 第79-80页 |
| 2.1.2 高粱根系中候选miRNA的定量PCR分析 | 第80-81页 |
| 2.2 候选miRNA在高粱叶片中的定量表达 | 第81-83页 |
| 2.2.1 高粱叶片中候选miRNA定量PCR引物特异性 | 第81-82页 |
| 2.2.2 高粱叶片中候选miRNA的定量PCR分析 | 第82-83页 |
| 2.3 候选靶基因在高粱根系和叶片中的定量表达 | 第83-88页 |
| 2.3.1 内参基因的筛选 | 第83-85页 |
| 2.3.1.1 内参基因定量PCR产物电泳检测 | 第83-84页 |
| 2.3.1.2 内参基因定量PCR引物特异性 | 第84页 |
| 2.3.1.3 内参基因表达的稳定性 | 第84-85页 |
| 2.3.2 候选靶基因的定量PCR引物特异性 | 第85-86页 |
| 2.3.3 候选靶基因的表达量 | 第86-88页 |
| 2.3.3.1 高粱根系中候选靶基因的表达量分析 | 第86-87页 |
| 2.3.3.2 高粱叶片中候选靶基因的表达量分析 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-91页 |
| 3.1 内参基因的筛选 | 第88-89页 |
| 3.2 miRNA表达检测方法的比较 | 第89页 |
| 3.3 miRNA对其靶基因的调控 | 第89-90页 |
| 3.4 候选miRNA的表达验证 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 全文结论 | 第93-94页 |
| 在读期间发表的论文 | 第94-96页 |
| Abstract | 第96-98页 |
| 致谢 | 第100页 |
