| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 AsFMT:改造木质素,加强生物能源利用 | 第16-18页 |
| 1.1.1 木质素的改造思路 | 第16-17页 |
| 1.1.2 AsFMT的发现 | 第17-18页 |
| 1.1.3 AsFMT的研究意义 | 第18页 |
| 1.1.4 AsFMT的研究现状 | 第18页 |
| 1.2 硫苷代谢的指示蛋白NSP | 第18-21页 |
| 1.2.1 硫苷 | 第18-19页 |
| 1.2.2 硫苷的水解 | 第19-20页 |
| 1.2.3 腈标记蛋白NSP | 第20-21页 |
| 1.3 重组蛋白表达和纯化 | 第21-23页 |
| 1.3.1 亲和层析 | 第21-23页 |
| 1.3.1.1 亲和层析原理 | 第21-22页 |
| 1.3.1.2 亲和标签 | 第22-23页 |
| 1.3.2 凝胶层析 | 第23页 |
| 1.4 蛋白质晶体学 | 第23-28页 |
| 1.4.1 蛋白晶体生长原理 | 第23-25页 |
| 1.4.2 X射线晶体衍射 | 第25-26页 |
| 1.4.3 同步辐射光源 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第28-52页 |
| 2.1 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 主要试剂 | 第29-34页 |
| 2.2.1 菌种 | 第29页 |
| 2.2.2 载体 | 第29-30页 |
| 2.2.3 感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.2.4 常用培养基 | 第31页 |
| 2.2.5 常用储液 | 第31-32页 |
| 2.2.6 蛋白纯化缓冲液 | 第32-34页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE的相关配方 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-52页 |
| 2.3.1 构建重组质粒 | 第34-40页 |
| 2.3.1.1 PCR扩增目的基因 | 第34-36页 |
| 2.3.1.2 凝胶回收 | 第36页 |
| 2.3.1.3 载体提质粒 | 第36-37页 |
| 2.3.1.4 目的基因及载体的双酶切 | 第37-38页 |
| 2.3.1.5 连接 | 第38页 |
| 2.3.1.6 化学转化 | 第38页 |
| 2.3.1.7 菌液PCR | 第38-39页 |
| 2.3.1.8 质粒PCR | 第39-40页 |
| 2.3.2 目的蛋白表达和纯化 | 第40-44页 |
| 2.3.2.1 目的蛋白小量试表达 | 第40页 |
| 2.3.2.2 目的蛋白的表达和纯化 | 第40-43页 |
| 2.3.2.3 亲和层析柱的处理 | 第43-44页 |
| 2.3.3 晶体条件筛选 | 第44-45页 |
| 2.3.4 晶体优化 | 第45-48页 |
| 2.3.4.1 筛pH | 第46页 |
| 2.3.4.2 筛沉淀剂 | 第46-47页 |
| 2.3.4.3 筛additive和salt | 第47页 |
| 2.3.4.4 晶体脱水 | 第47-48页 |
| 2.3.5 接晶种 | 第48-49页 |
| 2.3.6 防冻液的配制 | 第49-50页 |
| 2.3.7 晶体相位信息的获得 | 第50-52页 |
| 第三章 AsFMT的表达纯化和结晶 | 第52-64页 |
| 3.1 AsFMT重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.2 AsFMT的表达和纯化 | 第53-59页 |
| 3.2.1 AsFMT的小量试表达 | 第53-54页 |
| 3.2.2 AsFMT的表达和纯化 | 第54-59页 |
| 3.3 AsFMT的晶体筛选和优化 | 第59-62页 |
| 3.3.1 AsFMT晶体初筛 | 第59-60页 |
| 3.3.2 AsFMT晶体优化 | 第60-62页 |
| 3.4 AsFMT晶体情况 | 第62-63页 |
| 3.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第四章 AtNSP1的结构生物学研究 | 第64-78页 |
| 4.1 AtNSP1重组质粒的构建 | 第64-65页 |
| 4.2 AtNSP1蛋白的表达和纯化 | 第65-66页 |
| 4.3 AtNSP1的结晶和优化 | 第66-68页 |
| 4.4 数据收集和处理 | 第68-70页 |
| 4.5 结构分析 | 第70-75页 |
| 4.5.1 AtNSP1的整体结构 | 第70页 |
| 4.5.2 同源蛋白的序列比对 | 第70-71页 |
| 4.5.3 同源蛋白的结构比对 | 第71-73页 |
| 4.5.4 AtNSP1结构的活性位点 | 第73-74页 |
| 4.5.5 AtNSP1和AtESP的分子对接研究 | 第74-75页 |
| 4.6 本章小结 | 第75-78页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第78-80页 |
| 5.1 研究结果 | 第78页 |
| 5.2 讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 附录1 | 第84-85页 |
| 附录2 | 第85-86页 |
| 附录3 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第90-92页 |
| 作者与导师简介 | 第92-93页 |
| 附录 | 第93-95页 |