| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第8-10页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| 1.1植物热激转录因子的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 植物热激转录因子的基本结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 植物热激转录因子的调控机制 | 第11-13页 |
| 1.1.3 植物热激转录因子的主要功能 | 第13-15页 |
| 1.2 原生质体再生机理研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 原生质体再生的生理研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.2 原生质体再生的细胞与分子生物学研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 本研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 主要生化试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 供试质粒和农杆菌 | 第18页 |
| 2.2 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-34页 |
| 2.3.1 材料的准备 | 第19-20页 |
| 2.3.2 椪柑的总RNA的提取 | 第20-22页 |
| 2.3.3 椪柑CrHSFA2基因克隆 | 第22-25页 |
| 2.3.4 椪柑CrHSFA2基因的表达分析 | 第25-28页 |
| 2.3.5 椪柑CrHSFA2过表达载体构建及遗传转化 | 第28-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1 椪柑各组织总RNA提取及质量检测 | 第34页 |
| 3.2 椪柑CrHSFA2基因cDNA的克隆 | 第34页 |
| 3.3 椪柑CrHSFA2基因全长cDNA序列分析 | 第34-36页 |
| 3.4 椪柑CrHSFA2基因的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.4.1 CrHSFA2蛋白理化性质、细胞定位分析 | 第36-38页 |
| 3.4.2 椪柑CrHSFA2氨基酸序列与进化树分析 | 第38-39页 |
| 3.5 椪柑CrHSFA2基因的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.5.1 热处理下不同组织的表达 | 第39页 |
| 3.5.2 愈伤组织原生质体培养过程中的表达情况 | 第39-40页 |
| 3.6 椪柑CrHSFA2过表达载体构建 | 第40-43页 |
| 3.6.1 椪柑CrHSFA2基因PCR扩增 | 第40-41页 |
| 3.6.2 载体质粒酶切反应 | 第41-42页 |
| 3.6.3 椪柑CrHSFA2基因重组质粒的PCR、酶切验证 | 第42页 |
| 3.6.4 椪柑CrHSFA2基因农杆菌表达载体的验证 | 第42-43页 |
| 3.7 愈伤组织对潮霉素的敏感性试验 | 第43-44页 |
| 3.8 愈伤组织对头孢霉素的敏感性实验 | 第44页 |
| 3.9 几个因素对椪柑愈伤组织转化率的影响 | 第44-46页 |
| 3.9.1 菌液浓度对愈伤组织转化CrHSFA2基因转化率的影响 | 第44-45页 |
| 3.9.2 侵染时间对愈伤组织转化CrHSFA2基因转化率的影响 | 第45页 |
| 3.9.3 共培养温度对愈伤组织转化CrHSFA2基因转化率的影响 | 第45-46页 |
| 3.10 筛选抗性愈伤组织 | 第46-47页 |
| 3.11 转化愈伤组织的GUS组织化学染色验证 | 第47页 |
| 3.12 转化愈伤组织的Real-time PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.13 原生质体产量的测定 | 第48-49页 |
| 3.14 原生质体活力的测定 | 第49-50页 |
| 4 讨论与结论 | 第50-52页 |
| 4.1 椪柑CrHSFA2基因克隆及表达分析 | 第50-51页 |
| 4.2 椪柑CrHSFA2过表达载体构建及遗传转化 | 第51-52页 |
| 4.2.1 影响椪柑愈伤组织遗传转化的几个因素 | 第51页 |
| 4.2.2 转CrHSFA2基因椪柑愈伤组织原生质体的变化 | 第51-52页 |
| 5 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
