| 目 录 | 第6-11页 |
| 英 文 缩 写 | 第11-12页 |
| 第一章 绪 论 | 第12-34页 |
| 1 基因治疗研究进展及发展前景 | 第12-18页 |
| 1.1 基因治疗的基本概念 | 第12页 |
| 1.2 基因治疗的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3 基因治疗的基因导入系统 | 第13-16页 |
| 1.3.1 病毒介导的基因转移系统 | 第13-14页 |
| 1.3.2 非病毒介导的基因转移系统 | 第14-16页 |
| 1.4 基因治疗中有待解决的关键问题 | 第16-18页 |
| 1.4.1 基因转染系统的安全性 | 第16-17页 |
| 1.4.2 目的基因的有效性 | 第17页 |
| 1.4.3 基因表达的稳定性 | 第17页 |
| 1.4.4 目的基因转染的靶向性问题 | 第17-18页 |
| 1.5 基因治疗的应用前景 | 第18页 |
| 2 肿瘤基因治疗 | 第18-27页 |
| 2.1 肿瘤的免疫基因治疗 | 第18-22页 |
| 2.1.1 肿瘤的细胞因子基因治疗 | 第18-21页 |
| 2.1.2 肿瘤的MHC基因治疗 | 第21页 |
| 2.1.3 肿瘤抗原靶向的基因治疗 | 第21页 |
| 2.1.4 肿瘤的共刺激分子基因治疗 | 第21-22页 |
| 2.1.5 抗体介导的肿瘤免疫基因治疗 | 第22页 |
| 2.2 肿瘤的基因联合治疗 | 第22-23页 |
| 2.3 肿瘤基因-放射治疗 | 第23-27页 |
| 2.3.1 肿瘤基因-放射治疗的理论 | 第23页 |
| 2.3.2 Egr-1基因的结构及其辐射诱导特性 | 第23-26页 |
| 2.3.3 辐射诱导启动子Egr-1的优化 | 第26-27页 |
| 3 IL-18和B7-1基因联合抗肿瘤治疗的实验研究 | 第27-32页 |
| 3.1 白细胞介素 | 第1827-32页 |
| 3.1.1 IL-18的发现背景与命名 | 第27-6327页 |
| 3.1.2 IL-18的分子结构 | 第6327-27页 |
| 3.1.3 IL-18的来源 | 第27-28页 |
| 3.1.4 IL-18的生物学特性 | 第28-30页 |
| 3.1.5 IL-18的信号传导途径 | 第30-31页 |
| 3.1.6 IL-18的肿瘤基因治疗 | 第31-32页 |
| 3.2 IL-18和B7-1基因联合治疗 | 第32页 |
| 3.3 多基因表达载体系统 | 第32页 |
| 4 立题依据 | 第32-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-46页 |
| 1 主要试剂及器材 | 第34-35页 |
| 2 仪器 | 第35-36页 |
| 3 质粒与菌种 | 第36页 |
| 4 细胞株 | 第36页 |
| 5 实验动物 | 第36页 |
| 6 照射条件 | 第36页 |
| 7 病毒及其处理 | 第36-37页 |
| 8 分子生物学实验方法 | 第37-41页 |
| 8.1 引物设计及合成 | 第37页 |
| 8.2 脾细胞总RNA的提取及质量鉴定 | 第37页 |
| 8.3 RT-PCR法钓取IL-18全长序列 | 第37页 |
| 8.4 RT-PCR产物鉴定及测序 | 第37页 |
| 8.5 重组表达载体构建 | 第37-41页 |
| 8.5.1 转化 | 第37-38页 |
| 8.5.2 质粒扩增 | 第38-39页 |
| 8.5.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| 8.5.4 限制性内切酶酶切反应 | 第39页 |
| 8.5.5 DNA片段回收 | 第39-40页 |
| 8.5.6 连接反应 | 第40页 |
| 8.5.7 重组子的鉴定 | 第40-41页 |
| 9 目的基因的表达 | 第41-43页 |
| 9.1 转染 | 第41页 |
| 9.2 G418筛选 | 第41页 |
| 9.3 ELISA法检测细胞上清中mIL-18蛋白 | 第41-42页 |
| 9.4 流式细胞术检测细胞膜表面mB7.1蛋白 | 第42页 |
| 9.5 RT-PCR半定量检测基因mRNA水平表达 | 第42-43页 |
| 10 细胞凋亡检测 | 第43-8743页 |
| 11 免疫学指标检测 | 第8743-44页 |
| 11.1 脾脏单细胞悬液的制备 | 第43页 |
| 11.2 脾细胞特异性CTL细胞毒活性检测 | 第43页 |
| 11.3 脾脏NK细胞毒活性检测 | 第43-44页 |
| 11.4 IFN-γ的诱生和活性检测 | 第44页 |
| 11.5 腹腔巨噬细胞(MФ)TNF-α的诱生及活性检测 | 第44页 |
| 12 免疫组织化学法检测肿瘤局部血管生成 | 第44-45页 |
| 13 动物模型的建立 | 第45页 |
| 13.1 接种肿瘤和动物分组 | 第45页 |
| 13.2 肿瘤测量和体积的计算 | 第45页 |
| 14 统计学方法 | 第45-46页 |
| 第三章 实验结果 | 第46-75页 |
| 1 重组质粒的构建 | 第46-55页 |
| 1.1 小鼠IL-18基因的扩增及序列测定 | 第46-49页 |
| 1.1.1 PCR法扩增小鼠IL-18基因 | 第46页 |
| 1.1.2 RT-PCR产物测序 | 第46-49页 |
| 1.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第49-55页 |
| 1.2.1 中间质粒pIRES-B7.1构建 | 第49-50页 |
| 1.2.2 双基因共表达质粒的构建 | 第50-52页 |
| 1.2.3 包含IL-18基因的单基因重组质粒构建 | 第52-53页 |
| 1.2.4 包含B7.1基因的单基因重组质粒构建 | 第53-55页 |
| 2 重组质粒的辐射诱导表达特性 | 第55-62页 |
| 2.1 X射线照射后重组质粒转染的B16细胞中mIL-18和B7.1 mRNA表达变化 | 第55-57页 |
| 2.1.1 重组质粒转染B16细胞 | 第55页 |
| 2.1.2 重组质粒转染的B16细胞中mIL-18 mRNA表达水平变化 | 第55-56页 |
| 2.1.3 重组质粒转染的B16细胞中B7-1 mRNA表达水平变化 | 第56-57页 |
| 2.2 不同剂量X射线照射后重组质粒转染的B16细胞上清中mIL-18分泌和细胞表面B7-1表达变化 | 第57-62页 |
| 2.2.1 重组质粒转染B16细胞 | 第57页 |
| 2.2.2 X射线照射后质粒转染的B16细胞上清中mIL-18蛋白表达变化 | 第57-59页 |
| 2.2.3 X射线照射后重组质粒转染的B16细胞表面B7.1蛋白表达变化 | 第59-62页 |
| 3 肿瘤基因放射治疗的抑瘤效应探讨 | 第62-67页 |
| 3.1 肿瘤局部注射重组质粒联合放疗的抑瘤作用 | 第62-65页 |
| 3.1.1 5Gy X射线联合基因治疗的抑瘤作用 | 第62-63页 |
| 3.1.2 2Gy X射线联合基因治疗的抑瘤作用 | 第63-64页 |
| 3.1.3 不同剂量X射线联合基因治疗的抑瘤作用比较 | 第64-65页 |
| 3.2 X射线照射对稳定转染细胞在体内生长的抑制作用 | 第65-67页 |
| 4 肿瘤基因治疗抑瘤机制的探讨 | 第67-75页 |
| 4.1 肿瘤基因治疗抑瘤免疫学机制的探讨 | 第67-69页 |
| 4.2 肿瘤基因治疗后肿瘤细胞表面B7.1表达改变 | 第69-71页 |
| 4.3 肿瘤基因治疗对肿瘤局部血管生成的影响 | 第71-72页 |
| 4.4 重组小鼠IL-18蛋白在体外对肿瘤细胞死亡的影响 | 第72-75页 |
| 第四章 讨 论 | 第75-83页 |
| 第五章 结 论 | 第83-84页 |
| 参 考 文 献 | 第84-93页 |
| 中 文 摘 要 | 第93-96页 |
| ABSTRACT | 第96页 |
| 博士期间发表及待发表文章 | 第100-101页 |
| 致 谢 | 第101-102页 |
| 吉林大学博士学位论文原创性声明 | 第102-103页 |
