| 摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 插图和附表清单 | 第14-17页 |
| 缩略词 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-36页 |
| 1.1 海藻酸及其寡糖的研究进展 | 第19-24页 |
| 1.1.1 海藻酸的化学结构及用途 | 第19-20页 |
| 1.1.2 海藻酸寡糖的制备 | 第20-21页 |
| 1.1.3 海藻酸寡糖的生理活性 | 第21-24页 |
| 1.2 海藻酸裂解酶的研究进展 | 第24-28页 |
| 1.2.1 海藻酸裂解酶的酶学特性及来源 | 第24-26页 |
| 1.2.2 海藻酸裂解酶活性的测定方法 | 第26页 |
| 1.2.3 海藻酸裂解酶基因工程菌的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.3 原核表达系统的研究进展 | 第28-32页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统 | 第28-31页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第31-32页 |
| 1.4 酶的协同作用的研究进展 | 第32-33页 |
| 1.4.1 酶系内的协同作用 | 第32-33页 |
| 1.4.2 酶系间的协同作用 | 第33页 |
| 1.5 论文选题意义及研究内容 | 第33-36页 |
| 1.5.1 论文的选题意义 | 第33-34页 |
| 1.5.2 论文研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-56页 |
| 2.1 材料 | 第36-38页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第36页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第37页 |
| 2.1.5 抗生素及其它试剂 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-56页 |
| 2.2.1 聚古罗糖醛酸和聚甘露糖醛酸的制备 | 第38-40页 |
| 2.2.2 引物合成 | 第40-41页 |
| 2.2.3 引物稀释 | 第41页 |
| 2.2.4 基因组的提取 | 第41页 |
| 2.2.5 质粒的提取 | 第41-43页 |
| 2.2.6 PCR条件 | 第43-44页 |
| 2.2.7 DNA电泳检测以及胶回收 | 第44-46页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 2.2.9 PCR产物的TA克隆 | 第46-48页 |
| 2.2.10 目的基因与表达载体的连接 | 第48页 |
| 2.2.11 目的蛋白重组菌的构建表达与蛋白纯化 | 第48-54页 |
| 2.2.12 TLC薄层色谱 | 第54-56页 |
| 第三章 实验结果 | 第56-103页 |
| 3.1 聚古罗糖醛酸和聚甘露糖醛酸的制备 | 第56-57页 |
| 3.1.1 酸水解制备 | 第56页 |
| 3.1.2 酶解法制备 | 第56-57页 |
| 3.2 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅰ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第57-67页 |
| 3.2.1 原核表达载体pGEX-4T-1-ZH0-Ⅰ的构建 | 第57-62页 |
| 3.2.2 重组酶ZH0-Ⅰ的表达 | 第62-64页 |
| 3.2.3 重组酶ZH0-Ⅰ的酶学性质 | 第64-67页 |
| 3.3 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅱ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第67-75页 |
| 3.3.1 原核表达载体pGEX-4T-1-ZH0-Ⅱ的构建 | 第67-71页 |
| 3.3.2 重组酶ZH0-Ⅱ的表达 | 第71-73页 |
| 3.3.3 重组酶ZH0-Ⅱ的酶学性质 | 第73-75页 |
| 3.4 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅲ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第75-84页 |
| 3.4.1 原核表达载体pGEX-4T-1-ZH0-Ⅲ的构建 | 第75-80页 |
| 3.4.2 重组酶ZH0-Ⅲ的表达 | 第80-81页 |
| 3.4.3 重组酶ZH0-Ⅲ的酶学性质 | 第81-84页 |
| 3.5 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅳ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第84-93页 |
| 3.5.1 原核表达载体pGEX-4T-1-ZH0-Ⅳ的构建 | 第84-89页 |
| 3.5.2 重组酶ZH0-Ⅳ的表达 | 第89-90页 |
| 3.5.3 重组酶ZH0-Ⅳ的酶学性质 | 第90-93页 |
| 3.6 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶的分子结构 | 第93-97页 |
| 3.6.1 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶的氨基酸序列分析 | 第93-95页 |
| 3.6.2 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶的同源建模和结构分析 | 第95-97页 |
| 3.7 海藻酸降解机理的研究 | 第97-103页 |
| 3.7.1 海藻酸裂解酶降解产物的研究 | 第97-99页 |
| 3.7.2 两种海藻酸裂解酶组合协同作用对于酶解效率的影响 | 第99-100页 |
| 3.7.3 三种海藻酸裂解酶组合协同作用对于酶解效率的影响 | 第100-101页 |
| 3.7.4 四种不同海藻酸裂解酶协同作用对于酶解效率的影响 | 第101-103页 |
| 第四章 讨论 | 第103-120页 |
| 4.1 海藻酸裂解酶的重组表达和纯化 | 第103-106页 |
| 4.1.1 海藻酸裂解酶的重组表达 | 第103页 |
| 4.1.2 海藻酸裂解酶的纯化 | 第103-106页 |
| 4.2 重组酶的酶学性质 | 第106-111页 |
| 4.2.1 重组酶的最适温度 | 第106-108页 |
| 4.2.2 重组酶的酸碱稳定性 | 第108-109页 |
| 4.2.3 重组酶的金属离子偏好 | 第109-110页 |
| 4.2.4 重组酶的底物特异性 | 第110-111页 |
| 4.3 海藻酸裂解酶的分子结构研究 | 第111-117页 |
| 4.3.1 海藻酸裂解酶的氨基酸序列分析 | 第111-113页 |
| 4.3.2 海藻酸裂解酶同源模型的初步分析 | 第113-117页 |
| 4.4 海藻酸裂解酶的协同作用及海藻酸降解机理 | 第117-120页 |
| 第五章 总结与展望 | 第120-122页 |
| 5.1 总结 | 第120-121页 |
| 5.2 展望 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附录A：攻读硕士期间发表论文及申请专利目录 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-130页 |
