| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 我国棉花黄萎病危害现状 | 第10页 |
| 1.2 植物抗病机制 | 第10-11页 |
| 1.3 全长 cDNA 文库的应用 | 第11-12页 |
| 1.4 病毒诱导的基因沉默（VIGS）在棉花中的应用 | 第12-13页 |
| 1.5 抗病相关基因在棉花基因工程中的应用 | 第13-15页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-28页 |
| 2.1 试验材料 | 第16页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第16页 |
| 2.1.2 菌种 | 第16页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第16页 |
| 2.2 试验方法 | 第16-28页 |
| 2.2.1 cDNA 文库数据处理与生物信息学分析 | 第16-17页 |
| 2.2.2 棉苗培育及接菌处理 | 第17页 |
| 2.2.3 棉花根系总 RNA 提取 | 第17-19页 |
| 2.2.4 实时荧光定量 PCR 表达分析 | 第19-20页 |
| 2.2.5 目的基因全长 ORF 克隆 | 第20-22页 |
| 2.2.6 基因真核超表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.7 真核表达载体的农杆菌转化 | 第23页 |
| 2.2.8 Floral dip 法转化拟南芥 | 第23-24页 |
| 2.2.9 拟南芥阳性植株筛选和分子检测 | 第24-25页 |
| 2.2.10 VIGS 载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.11 农杆菌介导的 VIGS 棉花的转化 | 第26-27页 |
| 2.2.12 棉花基因沉默效果鉴定 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-54页 |
| 3.1 cDNA 文库数据处理与生物信息学分析 | 第28-37页 |
| 3.1.1 与公共数据库比对 | 第28-31页 |
| 3.1.2 COG 功能分类 | 第31-32页 |
| 3.1.3 KEGG 分析（信号通路分析） | 第32-34页 |
| 3.1.4 GO（ Gene ontology）注释 | 第34-35页 |
| 3.1.5 高丰度表达基因 | 第35页 |
| 3.1.6 转录因子（transcription and factors）分析 | 第35-36页 |
| 3.1.7 不同基因在黄萎病菌诱导后的表达分析 | 第36-37页 |
| 3.2 GbCRK、GbVPE 不同品种时空特异性表达 | 第37-39页 |
| 3.2.1 黄萎病菌分离试验 | 第37-38页 |
| 3.2.2 棉花总 RNA 的提取与 cDNA 的合成 | 第38-39页 |
| 3.3 黄萎病菌胁迫下不用关键基因在棉花不同抗、耐品种中的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3.1 GbCRK 在不同抗感病品种中的差异表达 | 第39页 |
| 3.3.2 GbVPE 在不同抗感病品种中的差异表达 | 第39-40页 |
| 3.4 基因克隆及生物信息学分析 | 第40-47页 |
| 3.4.1 基因克隆及序列分析 | 第40页 |
| 3.4.2 GbCRK 的生物信息学分析 | 第40-44页 |
| 3.4.3 GbVPE 的生物信息学分析 | 第44-47页 |
| 3.5 真核超表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.5.1 目的片段的扩增及测序 | 第47页 |
| 3.5.2 目的基因和表达载体的连接 | 第47-49页 |
| 3.6 转基因拟南芥阳性植株的筛选和分子检测 | 第49-50页 |
| 3.6.1 转基因拟南芥阳性植株的筛选 | 第49页 |
| 3.6.2 转基因拟南芥阳性植株的 PCR 检测 | 第49-50页 |
| 3.7 GbCRK GbVPE 在棉花中的功能验证 | 第50-54页 |
| 3.7.1 GbCRK GbVPE 的 VIGS 载体构建 | 第50-52页 |
| 3.7.2 VIGS 沉默棉花 GbCLA1 基因验证 | 第52页 |
| 3.7.3 VIGS 沉默棉花基因验证 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 关于 cDNA 文库分析 | 第54-55页 |
| 4.2 关于 GbCRK 基因功能预测 | 第55页 |
| 4.3 关于 GbVPE 的表达分析 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 A 试验所用载体图 | 第63-65页 |
| 附录 B 试验所用试剂配方 | 第65-68页 |
| 在读期间发表的论文 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
